retrovirális vektorok
A retrovirális vektor (retrovirális vektor, egy páncél retro- - prefix jelenti, a „hátrafelé”, „vissza”, és a vírus - méreg; .. Lat vektor - hordozó csapágy) - vektor elemeket tartalmazó retrovírus genom. szükségesek a replikációt a sejtekben. A legegyszerűbb kiviteli alakban a virális genom eltávolítjuk a kódoló gének specifikus antigének (gag), reverz transzkriptáz (pol), és a virális burokfehérjék (env), és azok helyett helyezzen be egy szelektálható marker gént (pl. Neomicin foszfotranszferáz gén). Általában, a retrovirális vektor tartalmaz további polilinkert, amely lehetővé teszi a klónozás idegen gének abban, valamint a gén lehetővé teszi olyan sejtek szelekcióját, az integrált retrovirális vektor szelektív táptalajon. A retrovirális vektor megtartja a benne rejlő képessége, retrovírusok bevezetett genomjába a gazdasejtben, és szaporodni őket, de csak a jelenlétében egy helper vírus. A retrovirális vektort használjuk a hatékony beépülését idegen DNS genomjába eukarióta sejtek, de van számos olyan tulajdonsággal, hogy korlátozza a gyakorlati alkalmazása a gyógyászatban. Különösen, amikor a bevezetése a retrovirális vektor genomjába okozhat inszerciós mutációk ami a különböző betegségek a szervezet. Továbbá, t. K. replikálása retrovirális vektor, valamint a természetes retrovírusok váltakozva valósítottuk gazdaszervezet genomjába DNS (provírus) és RNS (a genom a virális részecskék), amikor klónozáshoz a retrovirális vektort tartalmazó DNS-fragmentumokat intronokat, az utóbbi, mint a általában következtében elveszett splicing. Azonban, továbbra is használhatja egy retrovirális vektort a kísérleti biológia, és a génterápia.
A retrovirális vektorok, amelyek nem képesek az önálló replikációra, nyújt hatékony beépülését idegen DNS a genomba állandóságának genetikai változások. Azonban, ezek a vektorok épülnek az osztódó sejtekben, okozhat inszerciós mutációk így viszonylag alacsony titereket a rekombináns vírus, és a kifejezés a beiktatott gén gyakran csökken a nagyon alacsony szintje néhány hónapon.
Azonban, a transzgének bejuttatására az emberi testbe abból a célból, génterápiás retrovirális vektorokat alkalmazunk legszélesebb körben. A bevezetése idegen DNS-nek az állat genomjába használhatja rekombináns retrovírusok. Az előnyök a retrovírusok, hogy ebben az esetben az integráció ismert mechanizmus egyetlen hely a kromoszómán épül csak egy példányt, és nem fordul elő átrendeződések beágyazott anyag. Tovább az előnye - a könnyű szállítás különböző fejlettségű. Preimplantációs embriókat lehet feldolgozni vagy koncentrált vírus készletek, akár együtt-tenyésztésével monolayer sejtvonalban, produtsiruschey retrovírus. Ön is használja a posztimplantációs embrió. Minden retrovírusok jók az utóbbi célra, de csíravonal sejteket megfertőzzük az alacsony frekvenciájú, ezért a hatásfoka A transzgenikus állatok csökken.
A a kölcsönhatás specifitásának a felülete retrovírusok célsejtek a fertőzés időpontjában biztosítja azok virion burokfehérjét gén által kódolt env. termék, amelyet érintkezésbe receptorfehérje fertőzött sejtek. Ez megteremti előfeltételei irányváltást kör vírus házigazdák, azaz sejtek, amelyek képes megfertőzni, változások a virális burokfehérje. Számos retrovírus szűk gazdaszervezet tartományban (ecotropic vírusok), például a humán immundeficiencia vírus (HIV). amely képes megfertőzni a limfociták egy alcsoportja expresszáló CD4 felületükön receptor.
A legtöbb figyelmet, mint egy olyan transzgének bejuttatására génterápiában adott vírusra Moloney egér leukémia (MoMLV). amely képes fertőzni gyakorlatilag az összes vizsgált rágcsáló sejteket. Vírusok csoport MoMLV-A képesek megfertőzni nagyszámú emlőssejtek, beleértve a humán sejteket. Vírusok széles körű gazda nevezzük amfotropikus.
Kifejlesztett három fő stratégia mesterséges változás tropizmus (host tartomány) vírus: közvetlen változást a sorrendben a burokfehérje gén nukleotid retrovírus burokfehérje összefüggésben az új ligandumok és pseudotyping.
A hátránya, retrovirális vektorok - DNS méretének korlátozása, amely képes szállítani őket. Csak töredékek kisebb, mint körülbelül 10 kb, lehet szállítani a genomok ezen a módon.
A retrovírusok, mint maga a természet előkészített genetikai mérnökök, hogy használja őket, mint vektorok genetikai anyag a szervezet genomjának hogy ezek a genetikai mérnökök kívánják változtatni: Ezek be stabilan a genomba, képesek bevezetni a genomba idegen DNS-t. Ezen kívül egy másik nagyon jó minőségű: akkor dobja ki a virális gének (gag, pol, env), és helyettük a két LTR beszúrni a gén mérnökök szüksége, és mentse a potenciális integráció és átadása idegen retrovírus információt a gazda genomba. Lássuk, hogy ez hogyan történt a segítségével, sejtvonalak a csomagoláson.