Az Agrobacterium - studopediya
Abban az esetben, nem-daganatképző T-DNS a növények transzformálása szükséges markerek. Ezt használják nem az ONC géneket magukat, és nos, és a támogatók és poliadenilációs helyek, amelyek között van elhelyezve bakteriális szelekciós markereket. Ez a neomicin foszfotranszferáz (neo, aminoglkozidnym antibiotikumokkal szembeni rezisztencia kanamicin- és neomicin) gigromitsinfosfat transzferáz (hpt, higromicin rezisztencia) hloramfenikolatsetiltrasferaza (macska, chloramphenicol ellenállás), (DHFR, metotrexát rezisztencia), és mások.
Az a képesség, hogy átalakítsa sejtek kétszikű növények is van néhány plazmidosoderzhaschie törzsek A.risogenes. A fertőzött növények által ezek a baktériumok, ez kiváltott képződését szövet, amelyet a nevezett a bozontos gyökerek. Ezért plazmidok indukáló ez a hatás, az úgynevezett Ri-plazmidok (gyökér-indukáló). Genetikai térképek hasonlóak a Ti-plazmid. Fertőző része a Ri-plazmid T-DNS-t. Azonban, a transzformált sejtek nem tumorképző. Ezek szintetizálni opinok, gyorsan növekszik a kultúra és az ember regenirovat egészséges termékeny növények. Ezért ezek a plazmidok vonzóbbá. integratív és bináris vektorokat hoztak létre ezek alapján.
3.2. Növényi sejtek transzformálása
Amikor dolgozik új növényfajok előzetes kísérletekben használva onkogént agrobaktreii melyik explantátumok alkalmas az ilyen kísérletekben. Ezek lehetnek szegmensei levelek, szár gumó, gyökér, szár, hajtás vagy in vitro szaporított növények. Ezután ismételjük meg a kísérletet nem tumorképző Agrobacterium. Továbbá, a bozontos szálak vagy kallusz gyökér átvisszük szilárd növesztési táptalajba, és a változó az összetétele a média és tenyésztési körülmények, elérése növény regenerálódását szerint az első rendszer.
Klón transzformált sejtek elő a protoplasztokból. Protoplastirovanie egy megbízható módszer az izolált növényi sejtek. A megfelelő körülmények között, újra szintetizálja protoplaszt sejtfalat, és belép a mitózis. DNS-szintézis egy jel készen növényi sejt transzformációs annak agrobaktériumok. Ebben a pillanatban, amely egy héttel a rajt után tenyésztése protoplasztokat a folyékony közegben, adunk nekik Agrobacterium. Miután további 1-2 hetes tenyésztést, a kapott szuszpenziót mikrotelepek növényi sejtek (nem után diszpergálódnak Division) szélesztünk szilárd szelektív táptalajon. Miután 3-6 hétig, kallusz képződik a lemezeken, ahonnan azután regenerálható teljes növény. Ez az a növény transzgenikus, amikor megfertőzni tartalmazó Agrobacteriumokat a rekombináns DNS-t.
Módszer átadása idegen gének növényekbe Agrobacterium nem univerzális. A fő hátrány a korlátozása az a gazdasejt. Csak ritka esetben képes volt átalakítani egyszikűek Agrobacterium. Például, lehetséges volt, hogy képződésének indukálásához gyökérgolyva a yam Discorea bulbifera (egyszikű növények) fertőzött Agrobacterium sejtek, amelyben a vir régió korábban indukáltuk megsebzés burgonya acetosziringon (kétszikű). De a probléma korlátozások összefügg nemcsak egyszikű. Sok faj a termesztett kétszikű is még nem találták meg az átalakulási körülményektől és / vagy teljes növények regenerálása olyan izolált sejtekben. Ezekben az esetekben, készítmények transzformáció alkalmazásával DNS-t izoláljuk.