Módszertani útmutatókat laboratóriumi diagnosztika madárinfluenza vírussal
6.7. Irányelvek a laboratóriumi diagnózis madárhimlővel
1. Általános rendelkezések
1.1. Laboratóriumi diagnosztika madárhimlővel tartalmaz: érzékeljük kórbonctani anyag pox vírus-részecskék; Vírusizolálás patológiás anyagot csirkeembrió (CE); beállítás biológiai minta (kétség esetén).
2. kiválasztása és előkészítése anyag
2.1. Az állat-egészségügyi laboratóriumi kézikönyv 5. 6. klinikailag beteg vagy elhullott madarat (csirke, pulyka, galamb, kanárik, stb.)
2.2. Friss kráterek vagy nyálkahártya madarak érintett helyeken készített diákat vékony kenetet mikroszkópos vizsgálat céljára. Egyidejűleg a kiválasztott kórbonctani anyag (epithelioma diphtheritic overlay) vírusizolálásra.
2.3. Kiválasztott patológiai anyagot trituráltuk mozsárban steril törött üveg, és elkészíti a 10% -os szuszpenzió pH-ja 7,2, steril sóoldatban. 7.4, amelyet azután 12 órán át 4 ° C-on keverékével 500 U / ml penicillinnel, 250 ug / ml sztreptomicin és 50 egység / ml nisztatin. Ezután a kezelés után, a szuszpenziót centrifugáljuk, 10 percen át 1500 fordulat / perc, és a borítás a BCH, IPA, hogy elkerüljék a bakteriális szennyeződés.
3. kimutatása vírusrészecskék pox
3.1. Kimutatására a pox vírus részecskéket elő kenetek (2.2) levegőn szárítjuk festés előtt 10. inkubáljuk 15 percig desztillált vízben, és megfestettük ezüstözés vagy Morozov Paschen módszerrel (lásd. Alkalmazás).
3.2. Mikroszkopikus vizsgálata kenet (folt Morozov) a világos-barna háttér készítmények mutatták, himlő vírus részecskék formájában kis kerek képződmények sötétbarna vagy fekete színű, rendezett önmagukban, párban, rövid láncok vagy klaszterek; amikor színezőanyagoknak jelenlétében Paschen poxvírus részecskék a mikroszkóp látómezőben látott kis kerek képződését sötét vörös színű.
4. izolálása madárinfluenza vírussal az EK
4.1. Avian pox elszigetelt 10..12 napos CE nyert gazdaságok mentes fertőző betegségek a madarak.
4.2. A kapott és feldolgozott 10% -os szuszpenzió, szennyeződéstől mentes mikroflóra, további szuszpenziót készítünk sóoldatban 10 és 10, majd minden hígítási térfogatban 0,2 ml-re a chorioallantois membrán (HAO) 4 embriók. Fertőzés után TBE inkubáljuk 6 napig inkubátorban 36,5. 37 ° C és a relatív páratartalom 60-70%. Az embriókat ovoskopiruyut naponta. TBE, meghalt az első 48 órával a fertőzés után, nem veszik figyelembe (aspecifikus halál). Az embriókat meghalt 3-b órával később, és az összes többi élve 6. napon a fertőzés után lehűtjük hűtőszekrényben 4 ° C-on 4 5 órán át, majd kinyitotta és böngészési állami Hao. A pozitív esetekben a HAO külön mutatja elhelyezkedő vagy összeolvadt pockmarks.
4.3. Észlelése esetén Hao pocks emlékeznünk kell arra, hogy a bárányhimlő vírus okozza a kialakulását Hao kis, lapos elváltozások, néha nagy, fehéres; galamb himlő vírus - a fő központja a domború középső himlő elváltozások, néha jelentős megvastagodása és duzzanat az egész zselés HAO (fajta medúza); zoster vírus pulyka képez Hao enyhe himlő elváltozások gyakran körül egy gyűrű alakú területen; amikor a vírus kanári himlő fertőzés kimutatására Hao kiömlött elsődleges és másodlagos elváltozások formájában a kis fehéres pontok.
Hao pox léziók hogy vékony keneteket vagy foltok a tárgylemezen és megfestjük az ezüstözés vagy Morozov Paschen kimutatására szolgáló eljárás vírus bennük (himlő) részecske (cm. Alkalmazás).
Abban az esetben, ha a kétértelműség eredményez vírusizolálálásával az első járat, a második soros áthaladását a vírus a vizsgálat alatt.
5. készítmény egy biológiai minta
5.1. A biológiai mintát helyezünk esetben az átvevő megkérdőjelezhető kutatási eredmények kenetek (2.2) és a vírus izolálása CE.
5.2. A biológiai vizsgálatokat végzett non-immun bárányhimlő vírus 3. 4 hónapos korban, nyert helyiségeiben ingyenes a fertőző betegségek a madarak.
5.3. A szuszpenziót a vegyület előállítását lásd a 2.3 fejezetet, enyhén dörzsöli a meghegesedett felülete és gerincet a sípcsont a tüszők kopasztás után azonnal toll.
5.4. A jelenlét az anyag a madárinfluenza vírussal által 5. 6 nappal a fertőzés után a címer megjelenik tipikus laphámrák, de sípcsonton - tipikus himlő szőrtüszőgyulladás. Mikroszkopikus vizsgálata kenetek elő a hám a gerinc vagy a csípő és a megbetegedett tüszők festettük ezüstözés módszerrel vagy Morozov Paschen módszert mutatnak himlő vírus részecske.
6. Laboratóriumi diagnózis himlő tekinthető bizonyítottnak, ha: kimutatjuk keneteket kórbonctani anyag pox vírus-részecskék; elosztása szer CES himlő; A pozitív eredmények a biológiai minta.
7. Kutatás Időtartam: mikroszkópos - 1 nap; TBE-vírus izolálása - 6 nap; A második passzálási - 12 nap; biológiai mintákban - 8 nap.
1. Eljárás színező részecske
1.1. Festési Morozov. Előfőzött három reagens:
- reagenssel N 1 (RUGE folyadék): 1 ml jégecet, 2 ml 40% -os formaldehid, 100 ml desztillált vizet és 1 ml folyékony karbolsav;
- reagens N 2: 5 g tannin, 100 ml desztillált vizet és 1 ml folyékony karbolsav;
- reagens N 3: 5 g kristályos ezüst-nitrát 100 ml desztillált vízben; Az oldat leadott egy külön edényben 20 ml. Ahhoz, hogy a maradék oldatot 80 ml ezüst-nitrátot adtunk hozzá cseppenként 25% ammónia-oldatot, amíg a kapott sárgásbarna, majd a barna-fekete csapadék feloldódik, és továbbra is csak kis mértékű opálosság. Ha az ammónia nem időben megállítják, a töltés ezüst-nitrát-oldatot (20 ml), és adjunk hozzá, hogy cseppenként, amíg a fény opálosság. Készítmények kész festés reagenst desztillált vízzel hígítjuk, a 1:10 arányban.
A készítményeket elő (3.1 pont) alkalmazunk a reagens N 1 (RUGE folyadék), amely 1 perc után leszívatjuk, desztillált vízzel mossuk, és a maratott reagenssel N 2 alatt melegítjük láng fölött, amíg a füst szellem lámpa (1. 2 perc). Ezután, vízzel való mosás után készítmények bevonva egy réteg szűrőpapír, és hozzáadunk 3 N reagenssel enyhe melegítés ig kenetek nem szerezhet sötétbarna színű, ami után ismét mossuk desztillált vízzel alaposan, levegőn szárítjuk, és megtekinthetők a merítés mikroszkóp rendszerrel.
1.2. Festése eke. A színező készítmények módszer szerint Paschen korábban előállított pác Leffler, amely 20% -os vizes tannin - 100 ml telített vizes ammónium-hidroxid-szulfát vas - 50 ml telített alkoholos oldat bázikus fukszin - 10 ml. Festés előtt az oldatot leszűrjük, tedd drogok, óvatosan melegítjük, amíg a gőz, és hagyjuk lehűlni néhány percig; majd desztillált vízzel öblítjük, és olyan készítményekhez alkalmazzák, Ziehl-féle oldat; enyhén melegítjük, amíg a gőzök hagyjuk lehűlni, majd desztillált vízzel mossuk, levegőn szárítjuk, és megtekinthetők a merítés mikroszkóp rendszer (1).
Módszertani útmutatókat laboratóriumi diagnosztika madárinfluenza vírussal
A dokumentum megtekintése: