iránymutatások
Iránymutatás volt A.N.Kalyuk.
Bakteriológiai vizsgálatok feltételesen patogén mikroorganizmusok
Bakteriológiai vizsgálatok feltételesen patogén mikroorganizmusok
Komplex laboratóriumi vizsgálat a mikroflóra tartalmaz bacterioscopic és bakteriológiai vizsgálata anyagot tartott a dinamikáját felvételi kórházi kezelés, a kezelés során, valamint a jelzések kezelt betegeknél, mint járóbetegek. Termények diagnosztikai anyagok kell elvégezni szilárd táptalajon, amely kiküszöböli a növekedés gátlását a mikroorganizmus más, és lehetővé teszi, hogy meghatározza a telepek számát. Intenzitása a mikroorganizmusok növekedésének lehet kifejezni a kereszt és megfelelnek a tartalmat egy bizonyos számú mikrobiális sejtet tartalmazó 1 ml diagnosztikai anyagok:
++++ bőséges növekedés konfluens kolóniákból (10 m / sejt)
+++ hatalmas növekedés izolált telepek (10 m / sejt)
++ mérsékelt növekedést több megszámlálható telepeket (legalább 50) (10 -10 m / sejt)
+ gyér növekedés az egyes telepeket (30-50) (10 m / CI).
A tanulmány a mikroflóra a felső légutak (garat, orr, száj). Az anyag a tanulmány: nyálka, gennyes váladék, barna, film, darabok infiltrátumok a biopszia. Az anyag a mikrobiológiai vizsgálat a száj veszik egy steril vattacsomóval éhgyomri a nyálkahártya a kilépőcsatornákon a nyálmirigyek, a nyelv felületén fekélyek (gyomor-kaparékból), a leginkább érintett területeken. Amikor a film a legújabb eltávolítani csipesszel. Anyaga a orrüreg hozott száraz és steril vattacsomóval. Az anyagot oltottuk Petri-csészékben a vér, vitelline-só-agar tápközeg Saburo. Amikor a vetés tampont anyagot dörzsölni a közeget a teljes felületen a tampon egy kis területen a 1-2 cm-es és a stroke az egész felületén. Ugyanakkor a vetés és elkészített festett keneteken Gram.
A tanulmány a mikroflóra az alsó légutakban. Az alapanyaga ez a tanulmány köpet, amely gyűjtött a vizsgálat napján reggel, miután megtisztította a fogak és a száj öblítés frissen forralt vízzel. A bőséges köpet kell köhögés fel az első rész a nyársat, és az azt követő gyűjteni egy steril tartályba és szállítják a laboratóriumba. Ahhoz, hogy tanulmányozza a mikroflóra köpet használjuk, mint egy mag hígítatlan köpet (kvalitatív módszer), és a tenyésztési módszer, az úgynevezett kvantitatív. A kvalitatív módszerrel vetési használt gennyes köpet rögök, sós vízben mostuk, orális mikroflóra. A kvantitatív módszerek homogenizáljuk 1 ml köpet. Ezután hígításokat készítünk, hogy lehetővé teszik, hogy csökkentsék a mikroorganizmusok számát a szájüregben. Mindkét módszerrel egyidejűleg vetés előkészített kenet, amely festjük Gram-festés. Kutatási lehet gennyes és nyálkás-gennyes köptetés amelyek jelen vannak a leukociták és az alveoláris epiteliális sejtek, sejtek ágyazott mucin, amelynek jelenlétében jellemző ürülék az alsó légúti traktusban. Ügyeljen arra, hogy az uralkodó a köpet natív mikroflóra, különösen a tok diplococcusokként (Pneumococcus), kis Gram-negatív pálcák (Pfeiffer coli) és mások.
Kvalitatív módszerrel. A laboratóriumban a köpet öntjük egy Petri-csészébe, van kiválasztva 2-3 gennyes dudor, amely egyszer mostuk sóoldattal, majd oltottuk vér és vitelline-só-agar tápközeg és Sabouraud Endo. Vető termelnek steril üvegbottal egyenletesen dörzsöli az anyag felületén a tápközeg. A vér agar lemezeken való vetése után szabhat lemezek antibiotikumokat (sztreptomicin, penicillin, tetraciklin, eritromicin és kloramfenikol), hogy gyors információt a hatóanyag iránti érzékenységét a túlsúlyban mikroflóra a termés. A második napon, számolja meg a telepeket (etiológája is jelentős növekedés több mint 50 telep), a homogenitás, a lakosság és a kábítószer-érzékenység növekedése a monokultúrás.
Vetés bronchiális mosóvíz mosófolyadékban. Mivel az anyag kiválasztott nyálka csomókat, amelyek anélkül, hogy előzetes mosást sóoldattal oltottuk szilárd táptalajon (lásd. A köpet) egy kémcsőben cukorbeteg húslevest. Hiányában a csomók nyálka inokulált anyagot tárcsázott egy Pasteur pipettával. Inkubációs egy éjszakán át 37 ° C-on
A tanulmány szem mikroflóra. A mintákat a kutatás orvos kiválasztja egy steril gyapot tamponnal, vagy üvegbottal. Az anyagot vett fertőzött helyek és bevetett 0,5% cukrot húslevest. Hiányában a növekedés 48 óra után kap egy negatív választ.
Bekenjük a fülből. Anyag steril gyapot tamponnal vett a hallójárat és oltottuk vér és vitelline-só-agar Sabouraud médium, dörzsölés az anyagot a közeg részlettel, majd eldörzsöljük egész csészét.
Vizelet. Tanulmány tárgyát középvonal reggeli vizelet kapott normál vizeletürítés vagy katéter venni. Bacteriuria indikátor, amelynek klinikai jelentősége, a jelenléte 100000 vagy több mikrobák 1 ml vizeletet.
Az első nap a tanulmány. A leoltott egy szabványos (3 mm) a vizelet bakteriológiai hurok (alaposan kevert) szektoronként A, I, II és III a Petri-csészében 5% vérrel agar lemezeken vagy egyszerű. Az ágazatban a közepes egy részét make vetés, dörzsölés anyagot egyenletesen az egész felületen, majd anélkül, hogy az új anyag az azonos hurok szélesztjük egy tápközeg a szektor I (3-4 löketek) szektor I II, II szektor - a III.
A telepek számát baktériumok különböző ágazatokban a Petri-csésze, attól függően, hogy milyen mértékben bacteriuria (a V.S.Rabinovskomu és V.V.Rodoman)
a készülékből. 25
A második napon a tanulmány. A mértéke bakteriuria 1. táblázatban függően az ágazat, amelyben megtalálható a növekedés a mikroorganizmus telepeket. Ha kevesebb, mint 100 ezer. Mikroba 1 ml vizelet telepnövekedés volt megfigyelhető csak szektorban egy Petri-csészében. A megjelenése a kolóniák növekedése Sector azt jelzi, a magasabb fokú bacteriuria. A telepek megszámlálása a szektorban a legkisebb növekedés nem nehéz. Eljárás növények szektor a legtöbb esetben lehetővé teszi a második napon a tanulmány kiemeli a kórokozót tiszta tenyészetben.
A tanulmány a mikroflóra sebek punctates, váladékok, szöveti kivágjuk. Váladékok és punkció inokuláljuk Pasteur pipettával kémcsövekbe vért és egy egyszerű sima agar, cukor húslevest. Swab anyagot beoltunk egy diagnosztikai egy Petri-csészébe 5% és 10% a vér vitelline-só agar. Az anyagot dörzsölik a szélén a közeghez, majd szétterítettük csésze révén ugyanazon tampont vagy bakteriológiai hurok.
A tanulmány a mikroflóra a női nemi szerv megcsonkítása. Szekréciókat összegyűjtöttük steril vattacsomót és oltottuk Petri csészékben 5% véres agar, vitelline-só-agar, mind folyékony táptalajon cső cukorbetegség, valamint a Endo közegben.
Vizsgálat az epe. Az epe gyűjtöttük hangzású, vagy működés közben a steril csövekbe és szállított a laboratóriumba 2 órán belül. A mintavétel pillanatában. 0,1 ml epe szélesztünk vér agar lemezeken, és a közeg Endo. Növények és a megmaradt kiindulási anyagot behelyeztük egy termosztáttal 37 ° C-on 24 óra elteltével, figyelembe veszi az eredményeket a primer termények számítva a telepek számát minden egyes faj szilárd táptalajon.
A vér elemzése. Blood koca az ágy mellett miután gondos kezelést a bőr (alkohol, éter). A cubitalis vénába vett 10 ml vért, melyet öntjük két lombik: először 150-200 ml cukor húsleves és a második a tioglikolsavat közegben (5 ml). Növények inkubáljuk 10 napig. 2, 3, 5, és 10-én nap vezérlőjeleket szélesztéssel Petri csészékben 5% véres agar. Vetés 5 ml vért lehet végezni egy üvegcsébe tápközegben két fázisban: szilárd és folyékony (kúpkerekes 5% vért tartalmazó agart 1% glükózzal és 50 ml 0,5% cukrot broth). Ez a technika kiküszöböli a többszörös passzálással, kiküszöböli annak lehetőségét, szennyező mikroflóra környezeti beoltás táptalajon lehetővé teszi, figyelembe véve a telepek számát (azaz, hogy értékelje bacteriaemia feszültséget). A vetés termosztátba helyezzük 37 ° C-on 10 napig. Napi tartalom ampullákat rázzuk ampulla és a dőlésszög ferde felület nedvesített szilárd táptalajon. Amikor a növekedés a telepek véres agar ferde elő azok az agyvérzés és azonosítottuk az általánosan elfogadott szabályait bakteriológiai. A mikrobák növekedésének hiánya a 10. napon adott végső válasz - steril vér kultúra.
Kutatás a bél dysbiosis. Előkezelt és szuszpendáljuk (vagy pergamen Voshchanka) steril papír mérete 3x2 bármilyen számú széklet, és lemérjük a torziós egyensúlyt. Egy darab papírra kép egy steril csőbe. Súly székletminta, mínusz a papírsúly, szorozzuk 9. után kapott összegét megszorozzák egyenlő a mennyiségű sós hozzá kell adni egy kémcsőbe. 1:10 hígításának (I).
Például: papír súlya 20 mg
széklet egy papír súlya 420 mg
420-20 = 400 mg; 400 mg 9 = 3600 (3,5 ml).
Emulgeálás után, steril üvegbottal vagy pipetta szuszpenziót állni hagyjuk szobahőmérsékleten 10-15 percig, és 0,1 ml-t át a következő cső 9,9 ml sóoldatban (hígítás 10). Ezután gyártsuk széklet hígítási titerre 10. Elsődleges hígító (10) oltottuk szilárd táptalajon izolálására patogén bélbaktériumok család (közepes Ploskireva Lewin). Ugyanakkor, hogy egy hatalmas (0,5-1,0) vetés folyékony táptalajt (Mueller, selenitovuyu, magnézium). A csövet, amelyben széklettel meghígítjuk 10 Pipettázzunk 0,1 ml felületén Sabouraud közepes és VSA. A hígításokat 10 növénytermesztésére csésze egy 0,5% véres agar tápközegben, és 0,1 ml-Endo. A növekedés az izolált telepek használt üveggyöngyök vagy spatulák. Üveg kerek gyöngyök 12-14 darab (pre-sterilizált) merítjük egy csésze vetőmaggal. Enyhe rázás közben a csésze gyöngyökkel 1 percig anyag egyenletesen oszlik el a közeg. Vetés gyöngyök kezdődik a közeg, amelyen azt vetik legnagyobb hígítás (10), átadó gyöngyök minimál hígítás. Izolálása anaerob bifidobaktériumok vetés hígításait 10, 10 és 10 a két cső (0,1 és 1 ml) regeneráltunk 1 órán Blaurock közegben. Vetés után csöveket erőteljesen forgatjuk közötti mancsok egyenletes eloszlását szuszpenzió. Aerob növekedés közeget termosztátba helyezzük 37 ° C-on (Sabouraud - 20 °) 18-24 órán keresztül. Tápfolyadékban anaerobok Blaurock fiók 48-72 órán át. A beoltás utáni napon mennyiségének meghatározására az E. coli és más baktériumok 1 g széklet a kinőtt kolóniák számát a megfelelő tápoldatban tekintetében az összeg oltóanyagból és a hígítási fokot. Így, ha egy közepes 30 Endo lactosonegative kinőtt telepek a beoltási 0,1 ml bélsár 10 hígítást (1: 100000), a számítás kell szorozni a 30 és 10 100000, azaz 1 g akarat 30000000 lactosonegative enterobaktériumok. És figyelembe véve a több laktóz-hemolitikus E. coli kolóniákat, a jelenléte a Staphylococcus, Proteus és más mikroorganizmusok. Határozza meg enzimatikus tulajdonságai és a hatóanyag-érzékenység a mikroorganizmusok. A kémcsöveket a közepes Blaurock készített törlőkendő. A mikroszkóp alatt bifidobaktériumokrói formájában tipikus Gram-pozitív pálcák, a megvastagított vagy elágazó láncú végein elrendezett egy római szám V, gyakran formájában klaszterek. Válaszul bakteriológus megadott százalékos vagy abszolút mennyiségét minden egyes csoport a mikroorganizmusok.
Azonosítása mikroorganizmusok. Azonosítására szolgáló módszerek mikroorganizmusok vizsgálata alapján a morfológiai, tenyésztési és biokémiai, antigén, és mások. Cultures tulajdonságait.
Gram-pozitív coccusok. Gram-pozitív coccusok egy család Micrococcaceae, amely a nemzetség Micrococcus és a Staphylococcus és Streptococcaceae család.
Family Micrococcaceae. Az orvosi mikrobiológia szükséges megkülönböztetni staphylococcus származó mikrococcus. Learn morfológiai tulajdonságok, hemolízis, képes növekedni olyan tápközegen, amely sót, pigmentet, fermentációs glükóz savas anaerob körülmények között, fermentációs glicerin. Mikrococcus 2-3-szor nagyobb méretű sejteket (0,5-3,5 mikron), nem fermentálására glükóz anaerob körülmények között és a glicerin pigment sárga rózsaszín. Differenciálása különböző staphylococcus végezzük egy sor teszt: plazmokoaguliruyuschey képesség lecitináz aktivitás, mannit fermentáció anaerob körülmények között, pigmentáció, érzékenység novobiocin (teszt - pozitív St. aureus és Szent epidermidis és negatív St. saprophyticus). Izolálása Staph vizsgált anyagot beoltjuk a differenciál diagnosztikai Szerda: vitelline-só agar. Amikor foltos Gram-festettük a Gram-pozitív Staphylococcus aureus és egyszeresen, párban vagy képez klaszterek szabálytalan halmok. Staphylococcus aureus ellenáll a nagy koncentrációban nátrium-kloridot a közegben (7-10%), amelyet elkülönítéshez alkalmazott patológiás anyagból. Amikor termesztett hús-pepton húsleves okoz annak egységes turbiditás és ad pelyhes csapadékot. A sűrű tápanyag médiumok aureus nő formájában egy kerek briliáns telepek sima élek (0,5-1,5 mm átmérőjű). A második napon a vizsgálat értékelte a mennyiségi a kolóniák növekedése, úgy lecitináz aktivitás izolált tiszta tenyészete mikroba (reseeding a csőben a tej vagy egy egyszerű ferde tenyészetet). A harmadik napon - tegye a vizsgálatok differenciálás és hatóanyaggal szembeni érzékenység.
Amikor meghatározzuk koaguláz aktivitás liofilizált nyúl vérplazma steril sóoldattal hígítottuk, 1: 5, és öntjük sterilizált ampullákba töltöttük 0,5 ml. A csövet oltunk be egy kacsnyi napi agar tenyészet a teszt törzs és inkubátorba helyezzük 37 ° C-on Az eredmények értelmezése után gyártott 30 perc, 1 óra, 2 óra és 24 óra. Tekintjük pozitívnak, minden fok plazma koagulációs egy kis vérrög, amely rögzítve marad, amikor fordult egy csőbe.
Lecitináz aktivitás meghatározása a vitelline-só agar. Számviteli reakciókban 24-48 óra makroszkopikusan jelenlétére problémás területek és a szivárvány halo a telep körül a Staphylococcus, jelezve, hogy ezek a lecitináz enzimet.
Amikor tanulmányozása mannit fermentáció beoltás egynapos agaros tenyészetét törzs termelt oszlopon 1 terület% mannit agar és folyékony paraffin. Ha a fermentálás mannit agar oszlop kék. Úgy ítélik meg egy pozitív választ a fermentációs 2/3 oszlop agar.
Ahhoz, hogy meghatározzuk a tenyészet pigmentáció aureus inokuláltuk 10% tejet agar. Elszámolása 18-20 óráig.
Képességének meghatározására hemolitikus Staphylococcus kultúra azt végzik 5% vér-agar (levett vér hozzáadása nélkül tartósítószerek) jelenléte által megvilágosodás a telep körül, amelyek egyértelműen azonosíthatók a továbbított fény. Pozitív hemolitikus Tesztagar emberi vérrel, rendszerint azért, mert hemotoxin mivel alapvető szerepet patogenézisében staphylococcus fertőzések játszik alfa-toxin, amely kimutatható egy nyúl véres agar.
Family Streptococcaceae. Streptococcusok egy nagy, és igen heterogén csoportját mikroorganizmusok. A legtöbbet tanulmányozott aerob képviselői: Streptococcus pyogenes, S. faecalis, S. pneumoniae. A mikroba egy gömb alakú, grampolozhitelen, kenetek szilárd tápközeg formájában van rövid láncok 2-3 coccusok, folyékony táptalajon hosszabb a lánc. Amikor a nő streptococcus figyelembe kell venni, hogy nagyobb szükség van a tápanyagokat. Ezért, táptalajok, amely glükózt (1%), a vér (5-10%) szérumot (10-20%) vannak tenyésztésére szokásosan használt, Streptococcus.