Citokémiai kutatás glikogén

A glikogén lokalizálódik a sejtek citoplazmájában és fontos szerepet játszik az energia sejtek anyagcseréjét. Amikor glikogén citokémiai vizsgálatban elsősorban PAS-reakció vagy PAS-reakció (megnevezett reagensek - perjódsav-Schiff).

Shabadash módszer

Hatása alatt a glikogén kálium-perjodáttal oxidált alkotnak aldehid vegyületek könnyen reagálnak a Schiff-reagenssel (-fuchsin kénessav). Azokon a helyeken, lokalizáció kiderült glikogén cseresznye-festéssel, amelynek intenzitása tudja ítélni az összeget glikogén a sejtekben.

Edények és berendezés

• Főzőpohárba vagy küvettába 50 ml.
• Mérőhengerek.
• Osztott pipetta.
• Lombikokat 250 ml kapacitású.
• Tölcsért.
• Égőket.
• Termosztátot.
• Mérleg.

• 0,03 M kálium-perjodát vagy nátrium: 230 mg perjodátot feloldunk 100 ml desztillált vízben. Készítsünk használat előtt.
• Schiff-reagens: 1 g bázikus fukszin feloldunk 200 ml forrásban lévő desztillált vízben. Lehűtve, egy oldathoz, amely 1 g kálium-metabiszulfitot és 20 ml 1 n. sósavoldattal. Hagyjuk állni egy nap. A teljes fehérítő aprított tabletta karbolfukszin hozzá, balra egy napig, majd szűrjük. Reagens sötétben tároljuk (előnyösen hideg) egy jól lezárt tartályban. Használható több hónapig (enyhe bőrpír jelzi alkalmatlansága a reagens).
• Savanyú víz: 10 ml 10% -os kálium-metabiszulfit oldatot adunk 200 ml desztillált víz és 10 ml 1 n. sósavoldattal. Készítsünk használat előtt.
• Shabadash reagens: 100 ml etanolban készített oldatához hozzáadunk 1,8 g réz-nitrát, 0,9 g kalcium-nitrát és 10 ml formaiint.
• 1 n. sósavat (82,5 ml tömény sósavat, a specifikus gravitáció 1,19 feltöltjük desztillált vízzel 1 literre).
• 0,1% -os alkoholos oldat halvány zöld festék (lihtgryun).

Vonásszín

• Készítmények rögzített (elkészítés után azonnal) folyadék Shabadash 30 percig.
• Mossuk két váltás desztillált vízzel.
• Oldatába merítjük a perjodát 20 percig (a sötétben).
• Mossuk három cserével desztillált vízben.
• Kénszerű vízzel öblítettük (1 - 2 perc).
• Schiff festési 30 - 40 perc (sötétben).
• Mossuk három változások a kénes víz 3 min.
• Mossuk három cserével desztillált vízben 3 percig.
• Foltos fény zöld festék 10-20 másodpercig.
• Desztillált vízben mostuk.

A reakciót, célszerűen az összes kémiai oldatokat helyezzük csészék vagy küvetták és szállítására gyógyszerek a fenti szekvencia.

Jelenleg reagensek citokémiai vizsgálatok glikogén gyári termelés, amely egyszerűbb a használata. Sajnos nem mindegyik jó minőségű.

Módszer Eredmény Shabadash

Glikogén festett cseresznye színe lila, zöld, háttér a kábítószert.

A számítás a mennyiségét glikogén által termelt szemikvantitatív módszerrel, és százalékban kifejezve.

Emellett a glikogén, a pozitív reakciót adnak ilyen PAS-pozitív anyagok, mint például semleges és savas mukopoliszacharidok, mukoproteinek, glikoproteinek és mások. Glikogén el könnyen más anyagok nyállal mintában vagy diasztáz.

A mintát a nyál

A gyógyszer kerül egy frissen nyálban és hagyjuk állni 30 percig kemencében. Ezután készítsen folt glikogén fenti módszerrel. Inkubációs a készítmények nyállal okoz bontást glikogén és a reakciót a Schiff-reagenssel nem kapunk rózsaszín elszíneződés.

Glikogén is azonosítani pre-inkubáció amiláz kenetek (1 ml szűrt amiláz feloldjuk 40 ml fiziológiás sóoldatban) 30 percig egy kemencében.

A gyakorlatban a nyál mintát általában nem végeznek, azonban alatt PAS-pozitív anyagot értelmezni, mint egy szabály, hogy minden poliszacharidok és nem csak a glikogén.

Referencia értékek Shabadash eljárás

A perifériás vér kenetek levő glikogén citoplazmájában neutrofilek (mint bőséges finom kavics), limfocita citoplazmába (például kis számú nagy szemcsékből) és a vérlemezkék (egyetlen nagy szemű). A csontvelő punctata glikogén kimutatható neutrofilek különböző érettségi fokú, limfociták és megakariociták.

A érett eozinofilek és bazofilek PAS-pozitív anyagok a következők: specifikus granulumok maradnak festetlen, és álljon ki a háttérben a diffúz festődése.

A monociták glikogén gyakran kimutatható formájában finompor-, mint a gabona, a háttérben a rózsaszínű vérzés.

Normális esetben, 3 és 10% eritroid sejtek tartalmaznak mukopoliszacharidok.

A csontvelő megakariociták glikogén érzékel granulátum formájában (egyágú 30-50), emlékeztető klaszterek a vérlemezkék. Az egészséges emberek száma megakariociták glikogenpolozhitelnyh van 58,45-65,55%. A vérlemezkék PAS-pozitív anyagot kimutatni a finom szemcsék formájában, szétszórva a sejt perifériájára formájában vagy intenzív központi elhelyezkedésű foltok.

A klinikai jelentősége Shabadash módszer

Fokozott glikogéntartalmat neutrofil figyelhető meg a különböző gyulladásos folyamatok, eritremii, cukorbetegség, csökkent - ha agranulocitózis, sugárbetegség, krónikus mieloid leukémia, különösen a progresszió a folyamat.

Számának növelése limfociták glikogenpolozhitelnyh (70 - 80% -ot) jellemző a limfoproliferatív betegségek, különösen a krónikus limfocitás leukémia.

Amikor trombocitopénia purpura és tüneti thrombocytopenia száma glikogenpolozhitelnyh formák megakaryocyták követően jelentősen csökkenthető splenektómia emelkedik a normál értékre.

Az akut leukémiák glikogén lehet kimutatni blaszt sejtek: akut myeloid leukémia formájában finom kavics a citoplazmában vagy a formában egy gyenge diffúz bepiszkolása, és részben blasztok PAS-reakció negatív. Akut promielocitás leukémia, van egy fényes diffúz citoplazmatikus festődés. A monoblastah reakció lehet negatív, gyengén pozitív diffúz, vagy diffúz, granulált formában (ha a reakciótermék detektáljuk formájában szétszórt kis vagy közepes méretű szemcséket, amelyek mentén a szélén a citoplazmában egy diffúz háttérben). Amikor erythromyelosis glikogén granulátumok eritrocitáiban megfigyelt formájában diffúz festési változó intenzitással - a normoblasts. Limfoblasztok tartalmaznak glikogén citoplazmában formájában közepes és nagy granulátumok perem köré a mag, néha koaleszcens blokkokba festetlen háttérben. A sejtek számát az ilyen jellegű PAS-reakció változik a különböző esetekre az akut limfoblasztos leukémia.

Citokémiai tanulmány glikogén végezhető nemcsak vérkenetek és a csontvelőben. Például, akkor tárja fel a kenetet a vaginális epithelium és az eredményeket a tanulmány, hogy megítélje a funkcionális állapot a petefészkek. Normális esetben a nők mutatják, sok glikogén a sejtekben, míg a kimerülése glikogén sérti a petefészek működését.

A tumorok glikogén másképp: érett jóindulatú daganatok tartalmaz sok glikogén az éretlen rákos daganatok drámaian csökkentette az összeget a glikogén. Csökkentett glikogén tumorsejtek valószínűleg használnak indikátorként rosszindulatú.

Mikrofotói PAS-reakció:

Irodalom:

Citokémiai kutatás myeloperoxidase

Myeloperoxidáz egy lizoszomális enzim, amely katalizálja a hidrogén-peroxid jelenlétében oxidációs különböző szubsztrátok. Ez lokalizált túlnyomórészt a konkrét azurofil granulumok a citoplazmában, és a marker a granulocita mieloid sorozat sejtek. Myeloperoxidase érzékel sejtek a granulocita sorozat, hiszen mieloblaszt.

Citokémiai lipidek

Citokémiai tanulmány lipid alkalmazásán alapuló színezékek, melyek oldódnak lipidek (szudán III, szudán IV, Sudan Black et al.). Azonosításához semleges zsír szudán III, színező zsírt narancs. Lipidek azonosított jobban Sudan Black (fekete elszíneződés).

Ring tárgyalás Geller

A gyűrű alakú szondát Geller tárgya kvalitatív reakciók meghatározására a vizeletben lévő fehérje. Mivel ez alapján a véralvadási reakció, vizsgált vizelet kell felelnie bizonyos követelményeknek: átlátszó, és van egy savas reakció.

számolás myelokaryocytes

A számítás myelokaryocytes csontvelő punctata hígítjuk 200-szor. Ebből a célból, 3 és 5 ml 4% -os ecetsav-oldatot adunk 0,02 ml punctata. A csövek tartalmát alaposan összekeverjük, és tele Goryaev kamera. Ülepítés után a képződött elemek (után 1 - 2 perc) számít myelokaryocytes nagy négyzetek 100 (hasonló számítva a leukociták számát a perifériás vérben).

Morfológia megakariocitikus csírasejtek

Megakaryoblasts - progenitor sejtek megakaryocyta sorozat. Méret - körülbelül 20 mikron. A sejtmag kerek, egy wiremesh kromatin struktúrát, néha formájában fonott tekercs. magszerkezet durvább, mint a differenciálatlan blasztok gyakran láthatók nucleolusok. A citoplazma bazofil, gabona-mentes, van egy keskeny perem. Gyakran sejt durva kontúrok, a citoplazmatikus folyamatokat és a kialakulását „kék” lemezek.