Az embriók átültetése lovak
BERENDEZÉSEK ÉS ESZKÖZÖK
Előállítás kanca-donorok és a címzettek embrióbehelyezési
Annak érdekében, hogy jelek felismerésére ivarzás végzett rendszeres mintavétellel kancák (és donorok és a befogadók) mén szonda. Sokkal jobb, hogy végezzen napi mintavétel. Ha hiány van a személyzet és a nagy tapasztalattal szakértők megengedhető kevésbé gyakori vizsgálatokat, de legalább hetente háromszor (pl: hétfő, szerda, péntek). Amikor kimutatására vadászat végezzük naponta kétszer rektális petefészek állapot eljárás.
Egyidejűleg megtermékenyítés kancák donor által végrehajtott művelet eredménye szinkronizálás szexuális tervezett funkciók kancák címzett szexuális ciklus kancák donor. Transzplantációs megtapadást lép fel, és a kis- szinkronhibája ovuláció kancák donor és a recipiens kanca transzplantációt megelőzően szexuális ciklusban. Transzplantátumok elfogadható, ha:
1) ovuláció kancák recipiens történt korábban, mint a donor 24 órán belül (például aszinkronitási szexuális ciklus a donor és a recipiens kijelölt 24 óra);
2) ovuláció kancák recipiens történt később, mint a donor körülbelül 72 óra alatt (-72 óra)..
Az embriók átültetése nagyobb aszinkronitási az ovuláció a donor és a recipiens nem kívánatos, és vezet csökkentett megtapadást graftok.
Ha donor és a termékenyített időben és megfelelő mértékű szinkronja szexuális funkciók donor és a recipiens közötti tartományban -72 és + 24 óra, hogy készítsen egy probléma Mares transzplantáció befejeződött, és lehetséges, hogy várni a pozitív eredményt. Extraction és transzplantációs embriók által termelt 8-8,5 nappal ovuláció után a kanca donor.
Előállítása laboratóriumi üvegáru, berendezések és létesítmények embrió-átültetés
Munka eltávolítására és a transzplantáció embriók szigorú aszeptikus intézkedések és az egészségügyi és állat-egészségügyi előírásoknak. Javasoljuk, hogy használjon eldobható eszközök és edények.
Üvegáruk használt, többféle katéterek olyan egyszeri felhasználásra-mossuk semleges tisztítószerrel, majd öblítjük futás desztillált elegyet kétszer desztillált vízzel. Üvegáruk (lombikokat, tölcsérek, pipetták, lemezek) megszárítjuk, csomagolva pergamenre, és sterilizáljuk száraz hő 2 órán át 150 ° C-on vagy 3 órán át - hőmérsékleten 140 ° C-on
Ugyanakkor a fertőtleníteni helyezzük üveg kémcsőbe egy fém katéter embrió transzfer pipettát átvitelére embrió. Egy gumi katéter embrió hasznosítás, fecskendők és tűk külön sterilizáló visszafolyató hűtő alatt forraljuk 40 percig, vizet kiürítjük megnyitása nélkül a fedelet, és szobahőmérsékletre hűtjük.
Jelenlétében az autokláv, minden termikus stabilitás a berendezések, védőruházat, stb lehet sterilizálni túlhevített gőzzel 1,5 atm módban. 30 percig.
A műanyag termékek, amelyek nem viselik a hő sterilizálás, mossuk, fertőtlenítettük 70% -os etanollal mossuk, szárítjuk, alatt tartottuk UV besugárzás legalább 2 órán át, és csomagolni egy steril papír és tároljuk germicid kamrában. Használat előtt a műszert a kamrában ismét tartalmazzák a besugárzási 2-3 órán át.
Műanyag kesztyűk és eldobható burkolatok kezeljük biokamere baktericid lámpák 2 órán át.
Előtt egy nappal a transzplantáció végezzük a tervezett nedves tisztítás és fertőtlenítéséhez 3% hidrogén-peroxid oldatot (vagy „Glyuteksa”). A készítmény a fertőtlenítő oldat 9 liter vizet adunk hozzá, 1 liter 25-20% peroxid-oldatot és 50 g mosogatószer. Fertőtlenítéséhez levegő a szobában segítségével germicid lámpák, amelyek magukban foglalják a 2-3 óra, és le 1 óra kezdete előtt a transzplantáció. Nem kielégítő teljesítményű UV sugárzás (2 W / m2) arányos növekedését annak időtartamát. Azokon a területeken, ahol a munkát végezni embriókat kell hőmérsékleten tartjuk 25-28 ° C-on és 70-80% -os páratartalom mellett.
Laboratóriumi berendezés és asztalok megtörölte egy vattacsomót mártott 70 ° alkohol. Palackok foszfát-pufferolt Dulbecco-táptalaj is kezeltük alkoholos törlővel, kalcinált zárótag és nyak az égő lángja. Ruházat szereplők sterilizálják kemencében vagy autokláv normál módban.
2. Az öblítő oldatot mosására használt méh kanca donor extrahálása után az embrió, hogy elnyomják a fejlesztése a véletlenszerűen töltve az üregben mikroflóra. Készítsünk 2 liter 0,9% -os sóoldatban (NaCl) alapján desztillált vízzel. Diszubsztituált hogy azt a forró (megelőzésére forráspont), lehűtjük 36-37 ° C-on, majd hozzáadunk 20 ml 3% -os „sokszög” készítmény (márka „Mosagrogen”) aránya 300 mcg / ml.
3. csomópont megoldás egy közepes gazdag energiaforrások támogatása embrió életképes állapotban. Erre a célra, Dulbecco-féle PBS-sel kiegészített 5,3% inaktivált magzati borjúszérumot és 5% szarvasmarha szérum albumin, és antibiotikumokat (polygenes 300 ug / ml). Ebben az oldatban, az embriókat helyezzük a csomópont eszközt, és átvisszük a méh recipiens kancák. Egy oldatot készítünk egy előre sterilizált ampullákba töltöttük és lezártuk. Erre a célra, egy steril fecskendőbe kivonják az injekciós üveg 10 ml Dulbecco-féle PBS-oldatban, és injektáltuk fiolákba.
Ehhez hozzáadunk keresztül steril fecskendőbe 0,3-0,5 ml inaktivált (eiőreagáltatott 30 percen át 56-58 ° C-os vízfürdőn) magzati borjúszérummal. Ezután, 0,1 ml polygenes (kiszámított érték összhangban a kezdeti dózis gyógyszer). A komponenseket összekeverjük óvatosan, elkerülve a habképződést. Ebben a környezetben, az embrió lehet közötti hőmérsékleten kioldódási és átviheti 37 ° C-on 30 percen belül.
Annak érdekében, hogy az optimális hőmérséklet mind a három elkészített oldatot helyezünk egy termosztáttal 37 ° C-on
Legutóbb, a külföldi firmypostavschiki ( «Minitube» Németország vagy «IMV», Franciaország) bemutatta az első nels környezet mosására és embrióinak lovak kényelmes csomag, amely csatlakoztatható az öblítő katéter. A kereskedelmi forgalomban kapható, mint felhasználásra kész közeg rövid távú tárolása embriók előrecsomagolt 10-20 ml.
Embrió kilábalás a méh kancák DONOR
Az embriókat a későbbi transzplantáció eluáljuk a méhbe keresztül kancák donor 8-8,5 nappal ovuláció után. A munka a kitermelés embriókat kell elvégezni a következő sorrendben:
1. mare donor vezette be a gép, fix. Szabad neki végbél a széklet. Töltsön WC külső nemi szervek, valamint a környező kültakaró. Tail kötszer, vagy pedig egy speciális műanyag eldobható tasakot és kötődik a felső kereszttartó a gép.
2. Előadó öltözött kezelt UV besugárzással eldobható műanyag kesztyű kéz veszi ki a katéter sterilizáló. Helper tölcsért öblítsük belül az előkészített mosófolyadékban. Artist teszi a kezét, és megszorította a fejrész a katéter, a műanyag fedelet. Vége részét fedezi tart egy maroknyi záró katéter külső, és a kezében az ujjak, a kéz levágja a hegye a csomagtartó, amely egy lyukkal.
3. Az elkövető belép a karnak a katétert a hüvelybe mare elválasztja hüvelykujját, simogatta fedelet, és nyomja a fejét a szerszám a lyukon keresztül a fedelet a méhnyak, majd a szervezetben a méh, amíg a latex ballonkatéter nem átmennek a méhnyak.
4. Annak érdekében, hogy stabilizálják a szerszámot a méhben, az asszisztens fecskendő segítségével egy speciális légcsatorna szivattyúk egy felfújható katéterballon 60 ml levegőt, nyaki reteszelő lyuk belülről, és bezárja a levegő áthaladását a katéter bilincs. A katéter csak húzza ki azt az üveget szorosan a méhnyak.
5. asszisztens kitölti keresztül egy tölcsér a katéter egy kis mennyiségű mosófolyadékot tartalmaz. Ezután a katétert fedél megakadályozza a levegő bejutását a bele. Asszisztens eltávolítja a tölcsért, és lefelé a külső végén a szerszám egy lombikba mosófolyadékkal. További infúziós oldat a méhbe és annak inverz extrahálást végzünk emelésével és csökkentésével a lombikba 1-1,5 méter magasabb, és alacsonyabb, mint a nemi szervek mare. méh perfúziós alapul közlekedőedények elve.
6. Végezzen háromszor mosóoldat méh perfúziós. Ezután kétszer mossuk öblítő oldat méh (cm „Oldatok készítése” szakasz).
7. A levegő ereszkedik le a rögzítő ballon és a katéter eltávolítása a méh.
8. Az edényeket használt oldatot átvisszük egy külön szobában vagy baktericid kamera keresni és értékelésére embriók (kikapcsolása után UV besugárzással!).
9. donor mare megjelent, és mentesül a rögzítés a gép.
SEARCH, ÉRTÉKELÉS ÉS feltöltő szerszámok embriókat a transzplantációs
Az életképes embriók van egy szabályos formájú (gömb alakú vagy enyhén ellipszis) áttetsző, van egy külön sejt szerkezete és jó magképződés megkülönböztethető köteg (embryoblast). Embrionális héj (kapszula) szorosan illeszkedik a sejttömeget és nem látható nézve (7. ábra).
Elpusztult embriókat átlátszatlan, matt színű, a külső héj (kapszula) erősen elválasztjuk a sejttömeget, sejtek ráncos és megszorította alaktalan dudor (ábra9). Transzplantáció embriók nem termelnek.
3. ábra. A katétert a visszakeresés embriók
4. ábra. Katéter palántázott kis (legfeljebb 0,8 mm átmérőjű) embriók szerelvény
5. ábra. Katéter palántázott kis embriók szétszerelt 0,5 ml szalma
Ábra. 6. Pipettázzunk transzplantáció a nagy (nagyobb, mint 0,8 mm átmérőjű) embriók belső műanyag katétert (2 db.) A csúcs és a fecskendő
Ábra. 7. Az életképes 8 napos embrió ló
8. ábra: Kétes 8 napos embrió ló
Ábra. 9. Az áldozat egy 8 napos embrió ló
Értékelést követően szánt transzplantációs embrió steril PBS-t az oldatból egy Petri-csészébe a csomópont oldattal. Céljából a kényelem, figyelembe véve a kis átmérőjű Petri-csészébe, váltási oldatot beleöntöttük egy vékony réteg (2-3 mm), és helyezzük a mikroszkóp tárgyasztalon alacsonyabb megvilágítás. A fecskendő (1,2 ml) egy adapteren keresztül, egy közepes és az embrió, amelynek átmérője nem haladja meg a 07, 0,8 mm-es, 0,5 beszívódik polietilén szalma (szívószálak) az alábbi sorrendben: 1/3 -1/4 a hossza szívószálak - csomópont közegben, majd 5-7 mm - légbuborékos, majd 1 / 3-1 / 4 szívószálak - közegben az embrió, majd ismét a légbuborék, és a maradék helyet megtöltjük a közegben. Érintkezik a ragasztó dugóval folyadék megszilárdul, tömítő végén szívószálak.
Piet megszakad az adapter és helyezzük egy olyan eszköz palántázott kifelé nyitott vége, és a ragasztó dugóval - egy vékony szondát, rá van csavarva a szerszám fejét, és egy 2/3 a hossza behelyezett szonda. Fent a szerszám kopás egészségügyi műanyag fedelet. Kész átadni szerszámot tárolja vízszintes helyzetben a hőmérséklet nem alacsonyabb, mint 18 ° C-on Legyen különösen óvatos, hogy gondoskodjon arról, hogy a behelyezett 2/3 hossza a szonda baleset nem támogatta mélyebb, ami elvesztéséhez vezethet a magzat.
Az embriók átmérője> 0,8 mm vannak ellátva csomópont pipetta belső műanyag katétert (például Minitube cég, Németország), amelyben az embrió szívja egy fecskendő egy adatcsere közegben térfogatban 2 ml (6. ábra). Ebben az esetben nincs szükség, hogy töltse az embrió 0,5 ml szalma transzplantáció előtt. Katéter belső szorosan rögzítve, a pipetta. Ebben az esetben a fecskendő össze van kötve a katéter végéig a transzplantáció.
Amikor dolgozik embriók szükséges gondosan figyelemmel kíséri a hőmérséklet az oldat és a környezet, ahol a hirtelen változások mind az egyik, és a másik irányba károsodásához vezethet és megsemmisítése a transzplantáció. Ezért minden manipulációt az embriók kell lennie egy szobában vagy kamrában megfelel a kívánt hőmérsékletet.
TRANSFER CSÍRA címzett kancák
Mare embrió transzplantátum recipiens végezzük a következő sorrendben:
1. Először is, hogy fokozzuk az átültetésre az embrió a méh kanca azt tanácsolják, hogy adja meg a címzett izomlazító (drog „Hanegif”, Magyarország, izomba 8-10 ml), és ha szükséges, egy nyugtató.
2. 15-20 perc után az injekció után mare recipiens vezetett a gépbe, fix, mentes a széklet ő végbél, alaposan mossa le szappannal és külső nemi szervek és a környező terület, öblítjük és szárítjuk papírtörlő, kötések és rögzített farok a legjobb pozíciót.
3. Öltözött eldobható steril műanyag kesztyű kézi szedési szerszám készített transzplantáció az embrió és a tetején a fejét, és része a kéz visel egy védő műanyag zacskóba, a fent leírtak szerint. A külső borító kenni steril kenőanyag (zsír-gél) a mesterséges megtermékenyítés vagy ultrahang. Egy fém katétert a szalma lyukat alaposan ellenőrizze állapota az embrió kimeneti nyílás képest a külső alátét katétert a megfelelő irányba állítsa a szerszámot a méhben kancák (nyílásukkal lefelé).
4. Írja be a kar egy eszköz a vagina kanca.
Húzza ki a felső védőburkolatot. Óvatosan előre a szerszám fejét a méhnyakon. Érintése nélkül a szonda szúrás eszköz egy második védő egészségügyi fedelet. Pipetta belső katéter hogy a segítségével egy asszisztens, aki kell egy fecskendővel a katéter úgy, hogy nem repedt, és a folyadék az embriót nem öntötte ki idő előtt.
5. írja be a szerszám teste a méh a recipiens kanca, hogy a mélysége 2-5 cm. Orientáló eszközt a mosógép horony úgy, hogy a kimeneti nyílást a méhet lefelé irányulnak, tolt tartalom Piet, csúszó a szonda egy eszköz segítségével. Amikor egy pipettával egy belső katéteren, egy fecskendő csatolt présel annak tartalmát (2 ml táptalajt az embrió) a méhbe a kanca.
6. Vegye ki a kar a szerszám a hüvelyen kívül. Szabad kanca és kimeneti a gép. A transzplantáció után a címzett kanca kívánatos povodit 5-7 percet, mielőtt az istálló.
Ezt követően mare címzett ajánlott természetesen progesztin terápia (napi intramuszkuláris injekcióval 2,5 ml 4% progeszteron olajban vagy progeszteron orális formában (Regumeyt, altrenogeszt), hogy fenntartsák a sárgatest funkció az előfordulása és a terhesség fenntartásához. A kezelés a recipiens végezzük, legalábbis addig, amíg placentatio (45 nap a terhesség).
UTASÍTÁSOK mesterséges megtermékenyítés és az embrió lovakat. - Divov Univ. Állami Kutatóintézet Lótenyésztési