2. függelék n
Rend az Egészségügyi Minisztérium, a Szovjetunió származó 31.07.78 N 720 „ON javítása betegek ellátásában gennyes sebészeti betegségek és megerősítése elleni intézkedések nozokomiális fertőzések”
N. melléklet 2. utasításkészlet bakteriológiai ellenőrzés higiéniai intézkedések az egészségügyi intézményekben (sebészeti osztály, a kórtermekben és az intenzív osztályon)
1.1. Útmutató bakteriológiai ellenőrzést a komplex higiéniai intézkedések és ellenőrzése sterilitás orvosi eszközök szánt alkalmazottai bakteriológiai laboratórium és az Egészségügyi Minisztérium fertőtlenítés állomások végző bakteriológiai ellenőrzést.
<*> - Utasítás által kifejlesztett All-Union Tudományos Kutató Intézet fertőtlenítési és sterilizálási az Egészségügyi Minisztérium, a Szovjetunió.
1.2. Bakteriológiai laboratórium Közegészségügyi-járványügyi és fertőtlenítés állomások figyelik legalább évente kétszer, bakteriológiai laboratórium egészségügyi intézmények szabályozott higiénikus körülmények (szennyeződés különböző tárgyak és levegő) havonta egyszer, és a vezérlő a sterilitás eszközök, kötszereket, sebészeti ágynemű, kéz orvosok és műtéti területen a bőr (opcionális) - 1 alkalommal hetente.
1.3. A tárgyak a tanulmány során bakteriológiai ellenőrzés:
- Különféle tárgyakat a környezet;
- vérátömlesztés rendszer újrafelhasználhatóságot.
- szondák, katéterek, bougies, gumikesztyű és dr.izdeliya, gumi és műanyag vegyületek;
- sebészeti varróanyag, felhasználásra előkészített;
- kéz műtét és a bőrt a műtéti területen.
2.1. Vizsgálata mikrobaszennyeződésének levegőben.
2.1.1. Bakteriológiai vizsgálat a levegőben rendelkezik:
- meghatározása teljes mikrobiális tartalom 1 cu. m levegőt.
- Tartalmának meghatározása Staphylococcus aureus 1 cu. m levegőt.
2.1.2. Levegőmintavétel bakteriális vizsgálatokat végeztek a következő területeken:
- egyházközségi és az intenzív osztályon és a többi. helyiségek igénylő aszeptikus körülmények között.
2.1.3. Air mintákat vettünk leszívással egy elektromos Krotova.
Rajz levegő sebessége 25 liter percenként. A levegő mennyiségét úgy kell át 100 liter meghatározására a teljes bakteriális tartalom és 250 liter jelenlétének detektálására a Staphylococcus aureus. Air tanulmány ülepítő módszer megengedett kivételes esetekben.
2.1.4. A teljes baktériumok 1 cc. m Air mintavételt végeztünk 2% Nutrient agar. Crops inkubáltuk 37 ° C-on 24 órán át, majd hagyjuk állni 24 órán át szobahőmérsékleten, és megszámoltuk a kinőtt kolóniák számát és termel újraszámított 1 cu. m levegőt. Ha agar táptalajt tartalmazó nőtt gomba-, azok számát, és a számolás 1 cu. m levegőt. A rekord számú gomba külön jelezzük.
Megjegyzés: A készülék szállításakor Krotov egyik szobából a másikba a felületének kezeljük fertőtlenítő oldat. Táblázat, ízületek és a belső műszer fedél belső és külső oldalán törölni alkohollal (70 °.).
2.1.5. Ahhoz, hogy meghatározzuk a S. aureus jelenlétére mintavételi végezni vitelline-só-agar (VSA). A lemezeket inkubátorba helyezzük 37 ° C-on 24 órán át állni hagyjuk további 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Telepek gyanús aureus, kötelezõ mikroszkópia és további azonosítása.
A vitelline-só-agar először eltávolítjuk staphylococcus telepeket alkotó prizmás halo telepek körül (pozitív letsitovitellaznaya reakció) vetjük alá, a további vizsgálat és pigmentált telepeket letsitovitellaznoy negatív reakciót. A gyanús telepeket al-tenyésztjük lemezekre vérrel agar vagy tejjel. További tanulmányok elvégezni a rendszer.
Vezetési bakteriológiai vizsgálatok stafolokokk.
Beoltás közben elektív közepes (vitelline-só, tejsavas só vagy tejes vitelline-só-agar). A beoltott táptalajt 37 ° C-on 2 napig, vagy egy nap, egy termosztáttal és egy további 24 órán át a fény szobahőmérsékleten.
2-3. Második vagy harmadik napon.
Otvivka agar ferde a további vizsgálatok nem kevesebb, mint 2 telepek gyanús aureus. A tanulmány elsősorban otvivayut telepeket ad pozitív letsitovitellaznuyu reakciót. Hiányában telepek a lemezeken vetjük alá további vizsgálat pigmentált telepek morfológiailag hasonlóak Staphylococcus. Amikor az egyidejű jelenléte staphylococcus a lemezeken lévő telepeket eltérő pigment kell otvivat legalább két különböző típusú telepek.
Csövek vetést termosztátba helyezzük 37 ° C-on 18-20 órán át.
4. A negyedik nap.
Inkubálás után a napi izolált törzsekkel ellenőrzött morfológiája színező tulajdonságok (Gram-festés) kiválasztása plazmokoaguliruyuschey aktivitást. Meg kell jegyezni, hogy a természet a növekedés a kultúra ferde bizonyos esetekben lehetővé teszi a „megjósolni” tartozik a fajok Staphylococcus aureus és Staphylococcus epidermis. Először is, mint általában, hogy egy gazdag egységes, buja növekedés, a második - egy nagyon szerény és egyenetlen növekedés során vetés.
Gram festés szintén a hagyományos módon. Mikroszkóp alatt festettük a Gram-negatív staphylococcusok van formájában ibolyáskék coccusok, rendezett klaszterek vagy kis csoportokban ( „csipkés”).
Plazmokoaguliruyuschuyu aktivitás van jelölve a plazma koagulációs reakciót (RCR).
Az eredmények alapján az RKP és letsitovitellaznoy aktivitás 70-75% -ában, a negyedik napon a vizsgálat is megerősítette az izolált törzset fajba tartozik, a Staphylococcus aureus és a megfelelő választ adnak ki. Az ábra mutatja a lehetséges kombinációit kiviteli alakjai és méréseink eredményeit az plazmokoaguliruyuschey letsitovitellaznoy aktivitást.
Ha a kultúra még csak most letsitovitellaznoy plazmokoaguliruyuschey vagy aktivitás, a végső válasz az azonosításához szükséges egyéb jelei a patogén (mannit fermentáció aerob körülmények között - AFM vagy DN-áz aktivitás).
Ezekben az esetekben a válasz ki, attól függően, hogy a kapott eredmények meghatározásakor ezeket a jellemzőket.
Ha szükséges, a 4. napon a vizsgálat lehet szállítani válasz meghatározására DN-áz aktivitását anaerob fermentáció vagy mannit.
Meghatározása antibiogram végre csak elkülönítése után a tiszta tenyészet, szerinti jelzések (szelekciós kezelési módszer, stb).
Az izolált kultúra Staphylococcus aureus fágtipizálás tárgyát.
Elszámolása fágtipizálás eredményeit antibiotikum-érzékenység, DNáz aktivitása. Végső szállítás a választ.
Értékelési kritériumok a mikrobiológiai szennyeződés a levegőben sebészeti klinikák
2.2. Tanulmányok mikrobaszennyeződésének környezeti tárgyak.
2.2.1. Bakteriológiai vizsgálat mikrobaszennyeződésének tárgyak a környezet biztosítja azonosításához Staphylococcus Pseudomonas aeruginosa, coliform baktériumok és aeromanad (szigorúan a bizonyítékok). Mintavétel felületén különböző tárgyak végezzük mosófolyadékot.
2.2.2. Figyelembe mosófolyadékokat termelnek steril gyapot tamponnal egy bottal, szerelt a csőben, vagy gézzel, 5x5 cm-es, sterilizált papír táskák vagy Petri-csészében. A nedvesítés azokba a csövekbe tampon öntjük 2,0 ml steril fiziológiás sóoldatban. Amikor a szalvéták steril sóoldatban adagoljuk steril kémcsőbe 2,0 ml. Napkin Capture steril csipeszek, megnedvesített sóoldattá helyezett csővel azonos kémcsőben után törlő vizsgálati tárgy.
2.2.3. A kontroll kis tárgyak keneteket vettünk a felület az egész téma. Ha nyomon tárgyak nagy felületű mosást végeztünk több helyen a vizsgálat tárgyát képező terület mintegy 100-200 kV. cm.
2.2.4. Izolálni staphylococcus make vetés közvetlenül egy Petri-csészébe vitelline-só-agar (lásd. A kutatás rendszerről Staphylococcus aureus). Továbbá, mivel használt tárolási közegben táptalaj 6,5% nátrium-klorid táptalaj 1% glükózt, öntjük kémcsőbe 0,5 ml, amelyben leoltottuk 0,2-0,3 ml öblítő folyadékot. A beoltott kémcsöveket 37 ° C-on 20-24 órán át, amely után teszik vetés VSA (lásd. A tanulmány diagramja Staphylococcus aureus).
2.2.5. Kimutatására a coliform csoport baktériumok beoltott a dúsítási táptalajt, amelyhez a tampont (géz) merítünk 10-20% kólsav húsleves vagy közepes Kessler. Egy nap múlva inkubáció 37 ° C-, hogy reseeding szerdán Endo. Gyanús telepeket Endo közepes mikroskopiruyut és tovább tenyésztjük a második mintát a fermentációs - Hiss közegen glükózzal. A táptalajt 24 órán át 43 ° C-on
Megjegyzés: Ha a sertés epe előállítására kólsav húsleves epekoncentrációs kell 20-szor kevesebb.
2.2.6. Azonosítani Pseudomonas aeruginosa különleges növények nem képes előállítani. Jellemzően telepek Pseudomonas aeruginosa is kiderült véresagar vagy közepes Endo. Colonies gyanús Pseudomonas aeruginosa, átoltjuk ferde agáron tartalmazó 5,2% glicerint és a mannit. Kolóniák Pseudomonas aeruginosa, hogy a ferde felület burjánzása egy zöldes árnyalattal, olajos méz konzisztenciájú, jellegzetes szagú. Az izolált Gram-festettük a kultúra, mikroskopiruyut meghatározza hemolitikus tulajdonságok lemeztken véres agar lemezeken.
Indikatív listája létesítmények figyelemmel bakteriológiai szabályozás:
A. érzéstelenítő szoba
1. Az inkubációs csőbe
2. maszk altatógép
3. Tee altatógép
4. A bot
7. A légzés zsák
8. Hands aneszteziológus - eszméletlen állapotból felélesztő, szeszter-
Keverjük össze az összes média-összetevő, kivéve a glükóz és tioglikolsav.
Cisztin előzőleg feloldjuk kis mennyiségű desztillált vízben, miközben fokozatosan hozzáadjuk a 10-20% -os nátrium-hidroxid-addig, amíg a teljes oldódás. Az elegyet meglúgosítjuk 10% -os nátrium-hidroxid-oldattal pH = 8,0-8,2, forraljuk egy kazán gőz-köpeny vagy a nyílt tűzön állandó keverés közben, amíg az olvadt agar 5-10 perc. Meg lehet autoklávban 20 percen át 100 °. majd adjunk hozzá forró vízzel az eredeti térfogatra, hozzáadott glükózt és tioglikolsav, átszűrjük egy ruhával, a pH-t 7,2-7,3. Resazurinnal oldatot adunk hozzá, összekeverjük, és szétosztottuk steril csövekbe 20 ml. Sterilizálja 20 percen át 120 °.
Thioglycolic közeg tárolható vetés előtt, megvédve azt a fényt, szobahőmérsékleten legfeljebb 7 napig a készítmény.
Megjegyzés: 1. A megengedett főzés nélküli táptalajban nátrium resazurin.
2. megengedett, hogy más típusú agar, de előre vytitrovannym számát.
- legfontosabb
- Rend az Egészségügyi Minisztérium, a Szovjetunió származó 31.07.78 N 720 „ON javítása betegek ellátásában gennyes sebészeti betegségek és megerősítése elleni intézkedések nozokomiális fertőzések”