Laboratóriumi diagnózis cryptospo
A diagnózis a cryptosporidiosis létesíthet végzett laboratóriumi vizsgálatok alapján a székletben (in vivo) és a kórbonctani anyag (posztmortem) a járványos, klinikai és patológiai adatokat.
Hogy tanulmányozza a laborban útmutató:
Friss székletmintákat tömege körülbelül 10 g, a végbél, vett 10-20 állatok betegség gyanúját vizsgált minták napján kiválasztása;
patmateriala mintákat holttestekből - kaparékból és kenetet a fertőzött bél helyek vagy részek a vékonybél, ami szükséges, hogy vizsgálja nem később, mint 6 órával halála után az állat.
Előállítása kenetek friss széklet. Egy bevont csúsztatható üveg sovány csepp széklettel, sóoldattal hígítjuk csepp, terjeszteni egy vékony réteg (nyomás nélkül!). A kapott kenet szobahőmérsékleten szárítjuk.
A használata flotációs módszerek. A mintát 3 g széklet helyezünk egy főzőpohárba 50 ml, öntött kis mennyiségű telített vizes nátrium-klorid-oldattal (400 g 1 liter forró vízzel, az oldat sűrűsége 1,18 g / ml), vagy cink-szulfátot (400 g 1 liter vízben, az oldat sűrűsége 1,24 g / ml) vagy egy keverék Pavlaseka (cink-klorid - 220 g nátrium-kloridot - 210 gramm vizet - 800 ml). Óvatosan keverjük rudat adunk üveg élek, szűrjük át egy szitán, és hagyjuk állni 15-20 percig. Ezután, a fém hurkot eltávolítjuk 15-20 csepp a felületi filmet visszük át üveglemezre teszik kenetet, és levegőn szárítjuk.
Fixálása kenetet. On szárítjuk kenet alkalmaznak néhány csepp etil (metil) és rögzített alkoholban 10-15 percig, amíg a teljes az alkohol lepárlása. Ezután kenetet festettük az alábbi módszerek.
Színező kenet Ziehl-Nielsen. Ahhoz, hogy előkészítse a Ziehl-oldat egy habarcs készítő bázikus fukszin - 2r hozzá 2-3 csepp glicerin eldörzsöljük alaposan kevertük, miközben fokozatosan etil-alkohol hozzáadása 96 ° - 12 ml, karbolsav - 5 g, desztillált víz - 100 ml. Az oldatot beleöntöttük egy üveg egy szűk dugóval, és elhelyeztük egy nap egy termosztáttal 37 ° C-on, és szűrőpapíron átszűrjük.
Freeze festett keneteken 20 percig karbololajból fuchsin oldatban, mossuk folyó víz, enyhén szárított, és az alkalmazott üveg 7-10% kénsav oldatot 30-60 másodpercig a fehérítés. Mossuk, majd folyó vízzel, és kenet dokrashivayut 5% malachitzöld oldattal 1-2 percig.
Színező kenetet safranin a Kuster. Készítsünk külön 3% safranint oldattal és 5,6% -os kálium-hidroxid desztillált vízben. Alkalmazása előtt a munkaoldatot: 5 csepp frissen vett safranint oldatot, és összekeverjük 1,5 ml kálium-hidroxid-oldatot.
A rögzített kenet megfestettük Safranin munkaoldat 5 percig, vízzel mossuk, aktív szénnel 0,5% kénsav-oldattal 15 másodpercig, vízzel mossuk, 5% -os nátrium-dokrashivayut malachitzöld 10% etanolban 10-15 másodpercig, vízzel mossuk mossuk és levegőn szárítjuk.
Színező elkenődik Romanovsky-Giemsa. Munka színezék oldatot készítünk a mértéke 1-3 csepp festék kész 1 ml vízben (pH = 7,0-7,2). Az egyik preparátumot 3,4 ml hígított festék.
Rögzített festett keneteken 20-30 percig, ami után azokat desztillált vízzel mossuk és szárítjuk.
A szín eredményeket. Szárított kenetet megtekintésekor nagy nagyítású mikroszkóppal immerziós objektívet.
- Ziehl-Nielsen - sav-Cryptosporidium peték lekerekített formájú. 4-5 mm-es, élénk piros színű különböző árnyalatai; azok egyértelműen megkülönböztethetők a közös kenet zöld háttér.
- a Kuster - oocisztákat festett halvány rózsaszín.
- Romanovsky-Giemsa - lekerekített oocisztákat nem festett vagy festett gyengén, bennük látható a periférián a sporozoiták hosszúkás enyhén ívelt, halványkék egy piros gyöngy.
Értékelése intenzitását fertőzés átlagosan 10 látóterével mikroszkóp:
+ - alacsony (1-3 oociták);
++ - átlagos (legfeljebb 25 oociszta);
+++ - magas (több mint 25 oocisztákat).
Post mortem diagnózis cryptospo bizonyos nehézségek: kapcsolatban a kis méret a peték, a hasonlóság a külső keneteket zsírcseppecskéket, vörösvérsejtek, stb, valamint a gyors autolízisét .. Kötelező követelmény - a megelőzés a fagyasztás és felolvasztás patmateriala. Kenetek és scrapings etanollal fixáltuk, és megfestettük szerinti Ziehl-Neelsen, majd nézve a mikroszkóp nagynagyítású segítségével egy merülő lencse (5; 13).
A tanulmány kenetet Cryptosporidium peték meg kell különböztetni az egyéb kórokozók, bélgyulladást okoznak a fiatal. Oocisztákat ejmery kenetet - különböző formában, jóval nagyobb Cryptosporodium megkülönböztethetők belül négy sporociszta mindegyike két sporozoiták. Bélféreg tojás - nagy, ovális, kerek vagy bochonkovidnoe, a héj egy összetett struktúra (1).