Meghatározása fertőző vírus titer
A vírus titerét - ez a vírus mennyiségét az egység által tartalmazott anyag mennyisége. Mivel a vírus mennyisége nem lehet kifejezett általánosan használt (térfogat, súly és így tovább. N.) egységek, igénybe a mérési egységekben fellépés vagy aktivitási egység. És a fertőző vírusok hemagglutinációs aktivitás. Ennélfogva, az egység a vírus mennyisége fertőzések és hemagglutinációs.
A dimenziója ezen egységek zivisit teljes és az arány a hibás virionok használt szuszpenzió objektumot titrálási módszer, és más tényezők. A gyakorlatban azt használják háromféle egységek számát a vírus: 1. - fertőző egységek a helyi károkat okozott vírusok és értékelni, mint egy egyszeri hatás; 2. - fertőző egység 50% vírusok az érzékeny élő objektumok statisztikailag értékeljük; 3. - hemagglutináló egység.
A legsokoldalúbb meghatározásának módszere a vírus titer egységekben 50% fertőző lépéseket. Ezen eljárás szerint, egységnyi mennyiségű vírus kerül elfogadásra olyan dózis, amely képes előidézni a fertőző hatást 50% A beoltott vizsgálati tárgyakat. A vegyületet ED50- 50% -os hatásos dózist. A dózisok számát vírus egységnyi anyag térfogata, és expresszálják a vírustiter az anyagban.
Mivel a teszt tárgyak laboratóriumokban tipikusan fehér egerek, csirke embriókat és sejtkultúrák, amelyben a vírus fertőző fellépés megnyilvánulhatnak halált, a klinikai tünetek és a változások pathoanatomical citopátiás hatást. Minden egyes vírus kiválasztott érzékenységnek a vizsgált tárgy és annak eredménye fertőzőképes keresetet, amelyben a hatás a fertőzés értékeljük. Attól függően, hogy milyen típusú vizsgálati tárgy és a formák fertőző cselekvési ED50 veszi az alábbi típusok 6. táblázatban mutatjuk be.
1 egy LD50 dózis vírus, amely 50% -át elpusztítja laboratóriumi állatok (rendszerint fehér egerek);
1 ID50-dózis vírus okozza a klinikai tünetek vagy a patológiás változásokat 50% fertőzött laboratóriumi állatok;
ELD 1 - egy adag vírus, amely 50% -át elpusztítja csirkeembriókból;
1 EID50-dózis vírus okozza a patológiás változásokat 50% fertőzött csirke embriókat;
1 TSPD50- dózis a vírus okozza a citopatikus hatás 50% fertőzött sejttenyészetek (tipikusan csövek, sejttenyészetek).
Száma ED50 (LD50 ID ELD50, vagy TSPD50 EID50) vírus egységben foglalt térfogatú vírus-tartalmú anyagot, és lesz a kifejezést titer (T) a vírus ebben az anyagban. Például, a T = 103,48 TSPD50 / 0,1 ml azt jelenti, hogy minden egyes 0,1 ml vírus-tartalmú anyagot tartalmazza 103'48 vírus dózisban (m. E. Több mint 1000, de kevesebb, mint 10.000, nevezetesen 103,48 = 3020 ), amelyek mindegyike okozhat citopatikus hatás 50% kémcsövek a kultúra sejtek.
Az említett egységek 50% -át a vírus fertőzés (LD50, ID50, ELD50, EID50, TSPD50) alkalmaznak azokban az esetekben, fertőző értékelését a vírus statisztikailag értékeljük a hatást zajlik, amikor tartva fertőzés a vírus által hordozott letális hatás, a klinikai tünetek, patológiás változások vagy sejtkárosító hatását.
Titrálás vírus, amelyet 50% -os fertőzöttség intézkedés - a legsokoldalúbb a technika alkalmas szinte bármilyen vírustitrálást, ha felveszi az érzékeny rá az élő rendszer (szöveg objektumot). Azonban ez a vírus titrálási módszer meglehetősen időigényes, és előírja a hosszú statisztikai számításokat.
A probléma meghatározásának a vírus titer egységekben 50% fertőző fellépés (LD50, ID50, ELD50, EID50, TSPD50) csapódik le, hogy megtalálja egy hígításban levő vizsgálandó vírus-tartalmú anyag mennyiségének fertőző dózis, amely tartalmazhat egy ED50 majd kiszámítja, hogy mennyi egységnyi vírust tartalmazott azonos térfogatú vírus-tartalmú anyag, amely lehet egy indikátor a vírustiter ebben az anyagban.
A probléma megoldására, az első a vizsgált vírus-tartalmú anyagot állítunk elő egy sorozat egymást követő 10-szeres hígítás. 10-szeres hígításban a töltés, két okból:
Először is, ahogy egy grafikonja egy fertőző vírusdózisok (ábra. 35), a görbe a függőség közel az a pont megfelelő ED50, megközelítések egy egyenes vonal egy jelentős intervallumban.
Ez azt jelenti, hogy egy bizonyos tartományon belül, amelynek középpontja a ponton ED50 logaritmusa közötti a dózis (hígítás) a vírus és a fertőző hatás akkor létezik, egy egyenes vonalú kapcsolat, r. E. A mennyisége fertőző hatás logaritmusával arányos a dózis a vírus (vagy hígításával) a régióban a kis- és különösen a nagy adag ez a kapcsolat megszakadt;
Másodszor, a 10-szeres hígítást megkönnyíti az ezt követő számítások.
És egyenlő térfogatú 10-szeres hígítású vizsgálandó beoltott vírus-tartalmú anyagot egyenlő csoportba érzékenyek a vírus élő vizsgálati tárgyak (egerek, csirke embriókat vagy sejttenyészetek). Így minden csoportban legyen legalább 4-6 vizsgálati tárgyakat, mivel kevesebb statisztikailag kiszámított érték vírustiterszint lesz túl sok hiba (statisztikai érték pontosabb, mint a nagyobb mennyiségű kiindulási adatok alapján) .Egy lehetővé fertőzés az eredmény az intézkedés a vírus (a halál, a klinikai tünetek, kóros elváltozásokat, vagy CPE) a fertőzött objektumokat és meghatározza, hogy mely hígulás a vírus hatékonynak bizonyult 50% -a érzékeny tárgyakat. Hígítás, amely 50% -os hatást interpolálva számítjuk ki egyenes vonalú. Amikor ilyen hígítás találtuk, úgy tekinthető, hogy a térfogata fertőző vírus hígított talált (megfelel 50% -os hatást) számú alkalommal, tartalmaz 1 ED50. Ugyanebben a képernyőn forrás (hígítatlan) vírust tartalmazó anyagot az ilyen dózisok (ED50) tartalmaz több, mint ahányszor a dolgokat hígítottuk, 1 adott ED50. Ezután alakítjuk, mint például egységek 50% fertőzés a vírus tartalmazza egységnyi térfogatban (ml) vírus-tartalmú anyag, amely lehet egy expressziós a vírustiter az anyagban