GOST 25753-83 állattenyésztéshez
Áraink alacsonyabbak, mint más helyeken, mert dolgozunk közvetlenül a beszállítókkal dokumentumokat.
szállítási módok
Ez vonatkozik a szarvasmarha, juh, sertés és egyéb állatok (prémes állatok, kutyák, macskák), neaktsinirovannyh élő vakcinák, valamint létrehozza módszerek laboratóriumi diagnosztika a betegség Aujeszky
Korlátozása érvényességi időtartama a: protokoll számát 3-93 IGU 12/3/93 (ICS № 5-93)
re 01/07/84 a 01 -07.8 "
Amennyiben nem tesz eleget a standard vádat
Ez az előírás a szarvasmarha, egy kost, sertés és egyéb állatok (prémes állatok, kutyák, macskák), a nem vakcinázott élő vakcinákkal, valamint létrehozza módszerek laboratóriumi diagnózis a betegség Ausski.
A szabvány diagnosztizálására alkalmazott állatbetegségek az állat-egészségügyi laboratóriumok kutatási intézmények.
A szabvány teljes mértékben összhangban van az ST SÜV 3454 81.
1. MINTAVÉTELI MÓDSZER
1.1. Ahhoz, hogy végezzen egy biológiai mintában, és a vírus izolálását patológiás vett anyag az állatok időtartama alatt legfeljebb a betegség klinikai tüneteit (reakció-hőmérséklet, a depresszió, anorexia klinika, viszketés, karcolás). Levágott állatok és elhullott patológiai anyagot kell venni és elemezni a nyáron b h. És ha annak tárolása hűtött állapotban 10-12 órát.
1.2. A laboratóriumi állatok szállított betegek, tetemek és az állati szövetek és szervek (agy, gerincvelő, tüdő, máj, lép, nyirokcsomók, mandulák), állatokból megszakítva -plody és a méhlepényben.
1.3. DLI tetőszerkezetek szerológiai mintákat kísérleti állatok figyelembe steril fiolákba, és nem kevesebb, mint 5 cm3.
4. oldal
Op. 2 GOST 257J3-®J
A szérumot eljárással előállított iszap tartani, hogy akár 10 napig + 4 ° C-on Ez megengedett egy hosszú távú tárolására szérum hőmérsékleten mínusz 20 ° C-on A szérum, hogy átlátható legyen és semmi jelét nem hemolízis.
1.4. Patológiai anyagot szállított a laboratóriumi és a kísérő dokumentumokat, amelyek jelzik a nevét a gazdaság, a típus és az állat életkora, járványos adatok, klinikai és patológiai-anatómiai képet, információt állatok immunizálására és a vakcinát.
2. MÓDSZER vIOLOGIChESKOY Provo
A módszer abban áll, reprodukálására a betegség egészséges nyulak oltottunk kórbonctani anyag.
2.1. Berendezések, anyagok és reagensek a vizsgálati használjuk:
centrifuga forgási sebesség legalább 3000 fordulat / perc;
nagreaa termosztát hőmérséklet 37 C ° C;
fecskendők kapacitása 1 vagy 2 cm 3;
a steril sóoldat, pH = 7,2;
pufferolt steril sóoldat, a pH * 7,2;
széles spektrumú antibiotikumok.
2.2. felmérés előkészítése
2.3. kutatások végzése
Elvégzésére biológiai mintából súlyú nyulak 2-2,5 kg. A felülúszót elő n. 2.2, két nyulakat intramuszkulárisan dózisban 1-2 cm3.
2.4. Az eredmények feldolgozása
Bnoprobu pozitívnak tekintettük, ha az állatok halt klinikai tüneteit az Aujeszky-féle betegség (idegi klinika, viszketés, karcolás) 2-10 napon belül inokulnrovannya kórbonctani anyag szuszpenziót. Ha az állatot ölnek elismerése nélkül
5. oldal
GOST 2575J- »3. oldal. 3
Cove Aujeszky betegség biológiai vizsgálatot megismételjük kórbonctani anyag az első járat.
A halála nyulak beadása után a szuszpenzió patológiás a sertésekből származó anyagok nélkül bizonyíték a viszketés és a karcolás jelezheti kiosztási Aujeszky vírus vakcina törzsek.
A halála nyulak beadása után a szuszpenzió anyagot patológiás prémes állatok semmi jelét nem viszketés és a karcolás jelezheti kiosztási Aujeszky vírust tartalmazó vakcina törzsek shatogennyh prémes állatok.
Az a vírus azonosítása hajtjuk vírusizolálási sejttenyészetben, majd semlegesítjük a reakció készítmény.
3. A vírusizolálálásával sejttenyészetben
A módszer abban áll, kimutatására tsntopaticheskogo hatás (CPE) a vírus sejttenyészetben és az ezt követően azonosításukhoz.
3.1. A berendezés, anyagok és reagensek a vizsgálatban: termosztát fűtési hőmérséklet 37 ° C; centrifuga forgási sebesség legalább 3000 fordulat / perc; Laboratóriumi mérleg egy mérési hiba nem több, mint 0,01 g;
szárító állvány; mikroszkóp bármilyen márkájú; hűtőszekrények vízfürdőben;
Egység tripsinnzatsin szövetek; mérő pipettát GOST 20292-74; üvegcső GOST 25336-82; Petri-csészék, GOST 25336-82; sterilizáló szűrők különböző méretű; steril, pufferolt sóoldatban, pH-7,2; a növekedési közeg és a tápanyag pohcherzhivayushuyu; tripszin-oldat;
szarvasmarha szérum sejttenyészetből; antibiotikumok és gyógyszerek mikostatncheskie; fenolvörös összhangban GOST 4599-73; Trypan kék oldat;
primer kultúra sejtek trnpsinnzirovannyh vesében és pajzsmirigyben sertés herék borjak csirkeembrió-sejt. RCT vonalon. VMK21 (bármelyik);
6. oldal
Aujeszky-féle betegség vírusa titere nem kevesebb, mint 1 U TCD „UCL>;
sgvorogku állatok nem tartalmaz a vírus elleni antitestek az Aujeszky-féle betegség (negatív);
A szérum specifikus gnpernmmunnuyu Aujeszky-féle betegség (pozitív).
3.2. Előkészítése és ff egység egy N-edik - a 2.2 tétel ..
3.3. kutatások végzése
A sejttenyésztő csöveket Pipettázzunk 0,2 cm 3 Valamennyi vizsgált anyag. Minden egyes minta esetében, a csöveket 4-6 használunk. A csöveket fertőzött sejt-tenyészetet 37 ° C-on 30 percig. Ezután a csöveket kivettük a sejttenyészet felülúszójából, és hozzáadunk 1,8 cm 3 a támogató tartalmazó táptalajban antibiotikumok.
A kontroll anyagként 4- csövek 6 nem fertőzött sejttenyészet, amelyben a táptalajban végezzük cserélni. A csöveket fertőzött sejttenyészet kontrollok, és hőmérsékleten inkubáljuk 37 C-on 2-5 napig, és a napi mnhroskopiruyut tsitopatichesknh változásainak elszámolásához. Amikor tsitopatnchesknh változások tenyésztő folyadékot mindegyik csőből egyesítjük és azonosítása izolált vírus termelt. Ha a vizsgálati anyag toxikus a sejtek vagy lehetetlen meghatározni a specificitását CPD, hordozta a további passzálás.
3.4. Az eredmények feldolgozása
Az eredmény a vizsgálat tárgyát képező anyag teszt pozitívnak tekinthető. Ha kimutatható a sejttenyészetben tsntopatogen-nek hatása a vírus, ami megjelenik a lekerekített sejtek megjelenése óriás sejtek és sejt lízis az eső el a sérült sejtek a pohárból.
A kontroll tenyészetekben (nem fertőzött) tsntopatncheskah nem kell változtatni.
Az eredmények szerint a virológiai vizsgálatok Aujeszky-féle betegség diagnosztizáltak, amikor tartozó fajok izolált vírus sejttenyészetben megerősítette a semlegesítési reakció (Az azonosítási módszer a vírus).
Azonosítási módszer a vírus
A lényeg az, hogy érzékeli metol pigopatncheskogo elnyomása a vírus sejtkultúrában pozitív szérumot.
4. A műszereket és anyagokat és reagenseket -BY n. 3.1.
7. oldal
GOST 2J753-83 a CRP is. 5
4.2. kutatások végzése
Beállítása előtt a semlegesítési reakciót a pozitív és negatív szérum 1:10 arányban hígítottuk tápközegben a sejttenyészet antibiotikumokat tartalmazó, és a fűtött vízfürdőn 56 ° C-on 30 rokon. Bájt két sor csövek (. 7 db) adunk 2 cm 8 szérum mindegyik csőbe: első sor - pozitív, a második - negatív.
Készítsünk tízszeres hígítású vizsgálandó vírus 10- 1 I0- 1 tápközegben a sejttenyészet elegendő mennyiségben beállítás reakció és vezetjük be a két sor csövek szérumok hígításokban I0 -7. térfogatban 2 cm3 csövenként. Csövek keverékével szérum és a vírus hígításokat vstryahnvayug és inkubáljuk 37 ° C-on 1 órán át. Ezután minden keveréket szérumhígítással a vírus hozzájárulnak 1 cm 3 per 4 sejttenyészet csövek. A csöveket inkubáltuk termosztátban 37 ° C-on
4.3. Obra Botko eredmények
Eredmények A reakció hajtjuk meg tsntopatncheskomu hogy a vírust 2-5 nap elteltével. Ebből a célból a titer a vizsgált vírus jelenlétében pozitív és negatív szérumok és zyrazhayut azt rönk $ TCD. ; „*. A titert úgy számítjuk ki módszerével Reed és Muench. A faj a vírustörzsállomány van beállítva a különbség vírustiter sera pozitív és negatív legalább két nagyságrenddel.
Készítsünk egy két-szeres hígítású vizsgálandó szérumok 1 • 2: 1 16 tápoldatban a kultúra sejtek anti
8. oldal
Cip. 6 GOST 2J7SJ-83
biotikamn. Ezután a szükséges mennyiségű vírust tartalmazó TTsDdasi 1000 azonos térfogatú ez az egyes csövekben sorozathígításaival szérumok. Az elegyet összerázzuk, szérumok és a vírus, inkubáljuk 37 ° C-on I órán át, majd -1 sejttenyészetben csövekben Pipettázzunk 0,2 cm 3 a keverék a szérum és a vírus és inkubáljuk 37 ° C-on 30 percig. Ezen időszak után a csöveket sejttenyészetben Pipettázzunk 1,8 cm * támogató közegben. Ugyanakkor fel a következő ellenőrzéseket:
fertőzetlen kontroll sejttenyészetekhez csövekben 3-4, amelyben a változás a táptalaj végezzük;
ellenőrzik a dózis a vírus. A szabályozás a dózis pontossága a vírus gyűjtött a reakció, a munka hígított vírus (körülbelül 1000 $ CDT, o.1sy>) készül hígításokat 10
4. Minden hígításhoz használt vírus 3-4 csövek sejttenyészet. A sejttenyésztő csöveket, hogy egy munkahígítását a vírus és annak hígítási sorozatot térfogatban 0,1 cm. A megvilágítás után 37 ° C-on 30 percig a kémcsöveket a tenyészet sejtet adtunk 1,9 cm 3 a növekedést támogató közegben;
nyomon szérum toxicitás. Ahhoz, hogy meghatározzuk a toxicitási szérum a kémcső tenyészetekben Pipettázzunk 0,1 cm3 szérum hígítás és 1,9 cm 3 alátámasztó tápanyag környezetben (3-A sejttenyésztő csövekbe és minden hígítás szérum);
irányítást a sajátossága a vírus. A csöveket a kultúra a vírusokkal fertőzött sejtek egy keveréket egy dupla adag egy működő előtt hígítani annak specifikus szérum titer (3-4 csövek sejttenyészet minden egyes hígítási keverék szérum + specifikus vírus).
Minden csövek sejttenyészetek felhasznált-a reakciókeveréket inkubáljuk 37 ° C-on S.
Magatartási napi mikroszkópos vizsgálata sejttenyészetek. Elszámolása a reakciót végezzük előfordulása tsitopzti-ügynökség vírus kontroll vírussal bevett dózisok a semlegesítési reakcióhoz.
3.4. Az eredmények feldolgozása
Szerológiai vizsgálat A alanyok szérumából tekintünk pozitívnak hiányában citopátiás hatása a időben lefolytatása szérum 1: 2 vagy nagyobb jelenlétében a következő eredményeket koitrolyah:
a kontroll a sejttenyészet nem kell megváltoztatni mono-c. yu sejtek;
9. oldal
kontroll vírusdózist tsitopatncheskoe intézkedéseket kell a hígítás és a vírus hígításaival és 10”, 10„és a 10 10 -3 4 (a végső hígítás legalább két cső) .;
kontroll „sera toxicitás esetében pozitív)! szérum (ill állatok) tsitopaticheskny nincs hatása, mivel szérumhígítással 1: 2; negatív szérummal (nincs specifikus antitest) kell lennie tsitopaticheskny a hatása, mint a tenyészetekben a kontroll vírussal dózisok (hígítás);
a kontroll a specifitása a vírus nem tsitopaticheskny hatás oltott tenyészetek elegyével specifikus szérum és a vírus.
A specifikus antitestek jelenlétét a alanyok szérumából jelzi fertőzés a személyek, csoportok, állati kórokozó Aueskn vagy lehetséges vakcinázás állatok elleni Aujeszky-féle betegség.
Pozitív szerológiai módszerrel sera kutatás nevaktsshshrovannyh állatok jelzi betegség gyanúja, amely megerősíti a beállítást egy biológiai minta.
10. oldal
Korrektor EI Eeteeva
Sd ** 0 s IAB 05S6.83 Cím pontban „h. 07.05 * 3 0.W5 p. I. 0,48 z ilyen. Nad I Tier 6<Х» Цена 3 доп.
Rend „Honor * Žiak” Kiadó szabványoknak. 11I5T. Budapest. Novooresienskmy ver. 3 TMI. „Ms<ковсг.нА зечаткмк». Будапешт. Лплид пер. в. Зак. 527