Bevonat a gyógyszer - a gyakorlatban hisztológus
Általános elvek és módszerek festés szövettani készítmények
Az alapot a festés a sejtek és szövetek fizikai-kémiai folyamatok (diffúzió, adszorpcióval, abszorpcióval, oldhatóság és mások.) Kerül sor a festék, és a mikroszerkezetek. Nagy jelentőségű a sűrűsége a szövet és a festék diszperziós, ami meghatározza a sorrendet és a festés sebességet.
A cél a színező világosabb azonosítása a különböző komponensek a sejtek és szövetek. Egyes színezékek biztosítja ezt a hatást, hogy feloldjuk kimutatható komponenseket, például semleges zsírokkal. Egyéb színezékek okoz kémiai reakció, mint például a kimutatására vas alkotnak ferrociánkéket savas körülmények között. Sok esetben, a festési folyamat csak akkor lehetséges jelenlétében egy maró, mint például a hematoxilin foltot anyagot a fémsók jelenlétében.
A szövettani gyakorlattal a bázikus, savas és semleges színezékek.
Basic, vagy nukleáris, festékek - egy bázis vagy annak sója, amely szerkezetek festett savas jellegű (kromatin magok, nucleolusok és mások.), És az úgynevezett bazofil (hematoxilin, tionin, kármin, metil-zöld, stb).
Savas színezékek - ez savak vagy sóik, amelyekben felfedi a szerkezetét az anyag és az alapvető jellegét (citoplazmatikus struktúrák sejtek, eritrociták, stb). Ezek eozin, savas fukszinnal, kongóvörös (kongorot), eritrozin.
Semleges színezékek: Sudan III, szudán IV, metilénkék.
Szövettani festési eljárás hagyományosan osztva progresszív és regresszív, a közvetlen és közvetett, egyszerű és összetett. Ha progresszív típusú festési eljárás addig folytatódik, míg amíg el nem éri az intenzív behatolás a festék a szövet. Regresszív jellege alapján az eredeti festési szerkezetek utólagos differenciálódás a kívánt szintre. Ha a festék oldat közvetlenül hat a ruhát, majd beszélni közvetlen festés. Festési előkezelés után a szövetet (maratás) hívják közvetett. A festési festék egy - egyszerű. és a használata több színezékek - komplex.
HASZNÁLAT ELŐTT szelet festés
Paraffin, vagy paraffin metszeteket celloidin-to-okra Shivani mentes paraffin bármely ő versenyek-oldószerben, - a benzol, toluol, xilol, benzol. Különösen óvatosan eltávolítottuk a vizsgálat előtt paraffin szövetet a polarizáló mikroszkóp alatti, mert paraffin kettőstörő tulajdonság. Paraffinmentesítést szerint végezzük a következő séma
Miután viaszmentesítésévei 100-150 gyógyszerek reagenseket meg kell változtatni. Viaszmentesített előállított termékek festésére közvetlenül mosás után desztillált víz, de annak érdekében, hogy elkerüljék peeling szakaszok, különösen, ha festjük Van Gieson, akkor jobb, ha a levegőn megszáradni. Ha festés elő nem azonnal, akkor viasztalanított és szárított termékek óvatosan, hogy ne sértse meg a szelet, egy dobozba, és festeni, ha szükséges.
NOTES festési technikával
Amikor festett metszetek vizes festékkel át a színezék desztillált vízben, és színezés alkohollal - a megfelelő alkohol oldat. Az előkészítés után válik intenzív színű, mossuk vízzel vagy alkohollal, hogy eltávolítsuk a festék fölöslegét (differenciálódás) figyelésével ez a folyamat a mikroszkóp alatt.
A szöveti metszeteket és paraffin tselloidinovoy kiöntés után, és kapott fagyasztó mikrotommal, festjük mérőedényben vagy széles száj óraüvegre. Egyidejűleg festettünk néhány metszetet, de mosott differentiate stb külön-külön.
A készítményeket lehet helyezni festőoldatban speciális tartályokban tervezett egyidejű festése nagyszámú üvegek. Ha bit készítmények, a racionális festéket, amelyet közvetlenül az szelet keresztül cseppenként pipettával. festék maradványok lehet ereszteni a palackba és újrafelhasználása. Kiszelyek D. (1962) javasolt fedél üveg fedél szakaszok, és utáni nedvesítés környezetben a motorháztető alatt gyapjú vízzel megnedvesítjük.
KÖVETKEZTETÉS megvilágosodás és szelet
Az egyik elsődleges meghatározó feltételek alkalmasságának szövettani készítmények mikroszkópos vizsgálat, az ő átláthatóság. Ezen túlmenően, a gyógyszerek meg kell védeni a kiszáradástól és a szennyezés. Mindezt úgy valósítjuk bevonva, és egy speciális közegben, amely lehet osztani vízzel elegyedő (glicerin, gumiarábikum, polivinil-alkohol, zselatin), és összekeverjük vízzel (xilol, toluol, ezek keverékei fenollal, éteres olajok).
Oldható derítőszerrel egyaránt közepes és lép, és előkészíti állandó preparátumokat.
Következtetés a közegben, vízzel elegyedő
Ezek közül a glicerin-zselatinos tápközegben egyre nagyobb mértékben használják. Szintén használja tiszta glicerin, azonban ez a módszer nem teszi lehetővé, hogy készítsen állandó preparátumokat.
R. Lilly javasolja e célokra gumiszerű szirup Apáti:
50 g tiszta gumiarábikumot
finomított cukor 50 g
A desztillált víz 50ml
Az elegyet feloldjuk vízfürdőn állandó keverés közben, majd 500 mg timolt. Használt a polivinil-alkohol.
Közepes vízzel elegyedő (glicerin kivételével), előmelegített vízfürdőben, egy fűtött üvegbottal leesett vagy pipettáztunk kiegyenesedett vágott, enyhén szárított, bevont száraz és tiszta fedőlemezt. Tiszta üveg rúd vagy sovány ujját finoman nyomni a fedél üveg. Ebben a környezetben a felesleges kiszorították, és óvatosan eltávolítjuk egy tiszta ronggyal.
Fehérítőszerek és szülést a közegben,
nem vegyíthető
A metszeteket ragasztott üveg vagy készítmények alaposan alkohollal dehidratáljuk (70%, 96% és 100%), majd helyezzük bármelyike fényvisszaverődésgátló anyagok. Azt találtuk, hogy a különböző vizsgálatok Egy különösen előnyös antireflexiós anyag. Így, amikor festettük Nissl módszer és Gram - Weigert jobb antireflexiós, és egyidejűleg differenciáló szer anilin olaj, de a fehérítő készítmények, amikor festettük Van Gieson annak használatát elfogadhatatlan. A leggyakoribb és közömbös tekintetében a színezék vegyületek a toluol és a xilol. valamint ezek keverékei fenollal (kristályos fenolt megolvasztjuk egy kemencében 56 ° C-on, és keverve a xilol arányban 1: 4 vagy 1: 6).
Jó dehidratált alkoholban és felvilágosult karbolfukszin xilol, majd tiszta xilol termékek készek aláírni egy speciális gyanta. E célból használnak gyanta növényi eredetű - balzsam (Canadian, szibériai fenyő és fenyő). Mindegyikük könnyen oldódik toluol és xilol.
oldási módszerrel: a lombikba, száraz toluollal öntsük gyanta, amely fokozatosan feloldódik felső gyanta. A folyamat lehet gyorsítani, ha a palack egy kemencébe helyeztük 37 - 40 „A C. A kapott sűrű oldatot öntjük a másik bank, és egy új adag toluollal adunk hozzá, miközben az oldatot keverjük, és beállítjuk a folyadék egy méz konzisztenciájú. Túl habarcs bepárlási toluollal ismét besűrűsödik. Főtt balzsam tárolt egy jól lezárt tartályban.
A gyakorlatban pathologia széles körben alkalmazott szintetikus műanyagból - polisztirol. A módszer alkalmazásának műanyagból van ellátva DS Sarkisov és részletes a kézi G.A.Merkulova "Tanfolyam patologogistologicheskoy Technology" (1969). Polisztirol igen jól oldódik xilol és toluol, átlátható és megkeményedik gyorsan alatt egy üveg tárgylemezre, hogy kialakítsa a vékony filmet. oldódás módszer ugyanaz, mint amelyet a növényi gyanták. Idővel azonban polisztirol törékennyé válik, repedések a filmben. ami megnehezíti a mikroszkopikus vizsgálat és teljes mértékben elfogadhatatlan mikrofilmezésre. Annak megakadályozása érdekében ezeket a hátrányokat, a 30% -os polisztirol xilolt adunk, egy lágyító közlésével a rugalmasság és a fólia rugalmasságát, kiküszöbölve minden hátránya a polisztirol. A jelenleg alkalmazott, mint lágyító dibutilftalát, általánosan használt elektronmikroszkóppal. Számos lehetőség polisztirol felkészülés a következtetést a készítmények:
1) 94 ml 30% -os polisztirol xilolban-t elkeverünk 6 ml dibutil-ftalát;
2) álló keverék 100 g polisztirol 100 ml xilolt és 12 ml dibutil-ftalát feloldunk 22 ° C-on vagy kemencében 37 ° C-on, keverés közben periodikusan.
A kész műgyanta tárolt egy jól lezárt tartályban. megkötése Technology szakaszok ugyanaz, mint, hogy alkalmazása során a vízben oldódó média.
NUKLEÁRIS festékek és ezek előállítás
Festése sejtmagok annak köszönhető, hogy a két mechanizmust a kémiai kölcsönhatás: 1) az alap festékek, mint például anilint, sókat képeznek jelenlétében DNS-t és RNS-t; 2) komplexek alakulnak fémionok alkalmazása foltok. A gyakorlatban gyakran használt pác festékek. Ezek közé tartozik a hematoxylin, kármin szafranin, gallocyanin, alizarin. Jó festett magokat, például festékek, mint a Janus green, Basic Brown, Fluor festékek (krezilibolya, Nile kék), theanine, Giemsa, metilénkék, bázikus fukszin, metil-zöld, és mások. Meg kell említeni, jó eredményeket festéssel atommagok áfonya juice, amely a felajánlott MD Lavdovsky vissza 1887-ben
Hematoxilin- főzési módokat
Hematoxilin -a növényi eredetű: ez nyert éteres extraktumot a börzsönyfa. Hematoxilin könnyen oldódik alkohol és rossz víz. Színező tulajdonságok van hematoxilin oxidációs terméket - hematein azonban festék használhatóvá válik csak az érlelés után - oxidáció, amely szükséges a 10 napig, 2 - 3 hét. A érési gyorsítható alkalmazásával sók az alumínium, króm, vas és mások.
Hematoxilin kristályos 2g
A desztillált víz 100ml
Vagy káli timsó 3g alyumoammoniynye
Jégecetet 10ml
Hematoxilin alkoholban oldjuk, és timsó - desztillált vízben, a két oldatot összekeverjük, majd hozzáadjuk a maradék komponenseket. Az oldatot időnként keverjük. 10-14 nap múlva besötétedik cseresznye színű, ami azt jelzi a hajlandóság a festék. Időtartam hematoxilin Ehrlich 4 - 6 perc. Majd mosás desztillált, majd csapvízzel, differenciálódásukhoz 1% -os sósav-alkohol hasznosítás vizes ammóniát és a végső öblítést desztillált vízben.
Hogy előkészítse a hidroklorid alkohol 100 ml 70% -os alkoholt adunk hozzá 1 ml tömény sósavat; előállítására vizes ammóniaoldatot 50 ml desztillált vizet adunk 2 csepp erős ammónia.
Eredmény: a nucleus sejtek (köpeny, kromatin) sötétkék nukleáris mátrix halvány kék vagy világos.
Keverjük össze a megoldások az I. és II, majd hozzáadunk 60 ml glicerin és 2,5 g higany-oxidot (sárga vagy piros). Az oldatot melegítjük, 100 ° C-on, lehűtjük, szűrjük. Használata előtt 100 ml oldathoz hozzáadunk 2 ml jégecetet. Harris hematoxilin előny a sebesség és a felkészülés festődésű sejtmagok egyértelműség.
A időtartama festődő 3-4 perc. Majd mosás és differenciálódását, hasznosítás vizes ammóniát és a végső öblítést desztillált vízben.
Az eredmény: élénk kék mag.
Hematoxilin Mallory (vizes).
Hematoxilin kristályos 2,5 g
Alyumoammoniynye alum 50g
Desztillált víz 1000 ml
Az oldatot inkubáltuk 10 napon át 25 ° C-on hozzáadunk 440 mg kálium-permanganát és 2,5 g timol. Többször elkeverjük, a felhasználás előtt szűrjük.
A időtartama festődő 3-4 perc. Ezután kövesse ugyanazt az eljárást, festésére hematoxilinnel egyéb módosításokat.
Eredmény: kék mag.
Friss tiszta áfonya összegyúrjuk porcelán mozsárban, összekeverjük azonos térfogatú 96% -os alkohol, ragaszkodnak 1 - 2 napig, majd szűrjük. A festés előtt a oldatot hígítjuk azonos mennyiségű 2% -os vizes káli timsó, és a 2 - 3 kristály timol.
A időtartama festődés 5-7 perc. Majd mosás desztillált vízben, és a differenciálódás a sósavas etanolt, öblítés desztillált vízben, kiszáradás, fehérítés és a következtetést.
Eredmény: A nucleus sötétlila.
Festése a sejtek citoplazmájában fordul elő kötőfehérjék bázisok és savas festékek. A diffúz csoport (savas) színezékek közé tartoznak a karbonsavak és a szulfonsavak, nitro-, azo-, és mások. A szövettani gyakorlatban mindig használt eozin, pikrinsav, narancs G, savas fukszinnal, kongóvörös (kongorot), azocarmine, eritrozin. Egyre alkalmazásával 1% -os vizes oldatok e színezékek, de lehet alkalmazni 1%, alkoholos oldatban. A időtartama festési tól 5 másodperc és 3-5 perc a fajtától függően, és színe a sorozat. Ha a gyógyszer festenek, a többlet tinta könnyen eltávolítható, öblítés desztillált vízzel, majd dehidratáljuk Vania-drog vagy vágott alkoholokban.