Besorolás interferoninducerek klinikai használatra alkalmas

Jelenleg minden okunk megvan azt hinni, hogy a közeljövőben a terület klinikai alkalmazásának interferoninducerek jelentősen bővült, és ezek a gyógyszerek, mint az interferon, használt SARS, Herpesz, vírusos hepatitis, HIV-fertőzés, encephalitis, veszettség, valamint annak megakadályozása, virális szekunder komplikációk alkalmazásából eredő citosztatikus ágensek és immunszuppresszív szerek.

interferoninducerek tartozik egy új generációs gyógyszerek. Ezeknek a használata gyógyszerek több előnnyel rendelkezik a rekombináns interferonok:

Interferoninducerek nincs antigenitását.

Természetes (de stimulált) szintézisét az endogén interferon okoz giperinterferonemii, ami gyakran fordul elő, amikor rekombináns interferonok és vezet súlyos mellékhatások.

Egyszeri beadása interferon indukáló szerek hosszú időn át keringő interferont terápiás szinten. Ahhoz, hogy ezt a szintet az exogén interferonok ismételt adagolást igényel a nagy dózisú rekombináns interferonok. Néhány interferon indukáló szerek van egy egyedülálló képessége, hogy futtatásához az interferon szintézisét a bizonyos sejtpopulációkban, hogy jelentős előnyei poliklonális stimuláció immunsejtek rekombináns interferonok.

Az interferon-induktorok van immunmodulátor tulajdonságokkal és a kombinált nemcsak a rekombináns interferonok, hanem más vírusellenes szerek, ami így egy szinergetikus hatása kombinált alkalmazása.

Általánosan használt gyógyszerek interferonok, rekombináns α-interferon, amely nagymértékben korlátozza azok antivirális tulajdonságokkal, mint A hatékony vírusellenes védekezési kell mindhárom interferon csoport, melynek szintézisét és interferoninducerek hivatkozott kérelmet.

növekedési hormon (STH) - egy fehérje által szekretált elülső lebenye az agyalapi mirigy a gerinces állatok. Jelenléte a kivonatokat a hipofízis volt megfigyelhető 1921. . Evans és J. Long, de csak két évtizeddel később, 1944-ben, azt formájában kapott tisztított terméket, és 1948-ban - a kristályos formában.

Az emberi agyalapi mirigy tartalmaz 3,7-6 mg növekedési hormon, ez képviseli egyetlen polipeptid-lánc 191 aminosavból

Az emberi növekedési hormon szintetizálódik specifikusan manipulált bakteriális sejtekben, ez nyilvánvaló előnyei nagy mennyiségben hozzáférhető, annak készítmények biokémiailag tiszta és mentes a vírusos fertőzést. A szomatotropin bioszintézis végeztük alkalmazottak Geddelem Mivel a DNS-szintézis az mRNS hormon majd azt átalakítani egy formában dvuhnitievuyu kapott kódoló gént a szomatotropin prekurzort, amely lehasad bakteriális sejtekben alkotnak az aktív hormon, a kutatók választotta a következő megközelítést. Az első szakaszban dvuhnitievuyu klónozott DNS-másolatát az mRNS és a restrikciós endonukleázzal kapott szekvenciát, amely kódolja a teljes aminosav-szekvenciáját a hormon, kivéve az első 23 aminosav. Ezután klónozott szintetikus polinukleotid aminosavának megfelelő 1 perc és 23 perc, és végül, kapott két fragmenst egyesítjük, és „csípett”, hogy egy pár promóterek és riboszóma kötőhely. A végső kitermelés 2,4 g hormon per 1 ml tenyészet, illetve 1% -a oldott fehérje a sejtekből egy olyan genetikailag módosított E. coli-törzset.

Inzulin (a Hist Insulae pancreaticae - hasnyálmirigy-szigetecske.) - belkovopeptidny hormon, szintetizált a β-sejtek hasnyálmirigy-szigetecskék; egyetemes anabolikus hormonok szükségesek a növekedéshez és fejlődéshez a szervezet, hasonló agyalapi szomatotropinénak fokozó amely e tekintetben is. Az egyik legszembetűnőbb hatása az inzulin a hipoglikémiás hatása.

Az inzulin - az egyik legalaposabban tanulmányozott hasnyálmiirgyhormonok. Ennek hatására a hormon kapcsolódik a vércukorszint szabályozásával. Úgy véljük, hogy az inzulin végez kisegítő szerepe a a glükóznak a vérből a tartály falain át, hogy az izom szövetekben, ahol a glükóz energiatermelési célból, vagy a sejtek a májban, ahol a glükóz szintetizálódik tartalék poliszacharid - glikogén. Ez arra utal, hogy az inzulin elősegíti eltávolítását a glükóznak a vérből eredményeként sajátos orientáció a sejt membrán felületén, amely megkönnyíti áthatolni a glükóz a vérből. A hiánya az inzulin a vércukorszintet növekedni kezd, amint glükóz nem diffundál szabadon a sejtekbe. Az utóbbi időben úgy véli, hogy az inzulin fontos szerepet játszik szabályozásában bioszintézisének glükóz a szervezetben.

inzulin Sendzherom szerkezet telepítve. Ez a heterogén ciklusos peptid két láncból álló összekötött két híd-szulfid. Az egyik a láncok, továbbá, hogy van egy belső diszulfid-hidat. Az A lánc 21 tartalmaz, és a B-lánc - 30 aminosavat tartalmaz.

Mivel az első kísérletek az inzulinnak diabetes kezelésére 1922-ben, ez a hormon szabadul fel a hasnyálmirigy az állatok (tehenek és sertések).

Számos oka van annak fejlesztésére alkalmas módszerek a nagyüzemi termelés és a forgalomba hozatal humán inzulin: köztük kereskedelmi megfontolások és érzelmi tényezők, és az igényeinek a tudomány fejlődése, és az esetleges kezelés előnyeit.

Az inzulin a tehenek és sertések kissé eltér az aminosav szekvencia a humán inzulintól. Különösen közel humán és sertés inzulinok: az utóbbi csak a C-terminális B-lánc treonin helyébe alanin. szarvasmarha és humán inzulinok különböznek három aminosav, és ezek a különbségek határozzák immunogén szarvasmarha inzulin fokozott aktivitás képest a sertés inzulin. Szinte minden kezelt betegek a szokásos módszerrel, azaz a injektált szarvasmarha inzulin a vérben antitestek jelennek meg az inzulinra. A antigén tulajdonságai inzulin határozzák részben szennyeződések a készítményekben. A legvalószínűbb, antitestek képződését, hogy az inzulin magyarázza néhány enyhe mellékhatásokat, ha az inzulin injekciók tehén, például sorvadása a szubkután zsír. Abban az esetben, erősen tisztított sertés inzulin, ezek a hatások hiányoznak. Továbbá, az ellenanyagok, hogy inaktiváljuk az inzulin a véráramban, így a betegnek az injekciót nagyobb adagok szükségesek. Az antitestek időtartamát is hátrányosan érintheti a biológiai hatását inzulin injekciót. Feltételezhetjük, hogy a humán inzulin még kevésbé lesz immunogén, mint a sertés inzulin.

Mivel a betegek száma a cukorbetegség és ezáltal a szükséges inzulin növekszik, ez elég lehet, hogy a rendelkezésre a jövőben csökkenni fog, mert a nyersanyaghiány - állathasnyálmirigy. Mivel a tisztán érzelmi tényezők jobb felhasználása érdekében a humán inzulin, mint bármelyik állat.

Több inzulin termelő élén «Eli Lilly and Co» használt, mint az alapját a humán inzulin előállításának rekombináns DNS technológiával. Szerint a rendszer a folyamat, fejlett «Eli Lilly» együttműködve a cég «Genenetech Inc.», az első lépésben, hogy újra a DNS-szekvencia az aminosav-szekvencia az inzulin, külön szintetizálva a mesterséges gének annak az A és B láncok. A 5 „végén mindegyik egy metionin kodon (amely a szintetizált fehérje N-terminális) és 3” végén - terminációs szekvenciákat. A gének mindegyike ezután ágyazva a β-galaktozidáz-gén a plazmidok és azok viszont be E. coli sejtek. Mivel a baktérium az tápközegben, amelyben gaiaktóz, amely indukálódik a szintézis a β-galaktozidáz, és vele együtt, az A és B láncok inzulin keresztül kapcsolódik egy metionin maradékot. Miután a baktériumok lízise és a kezelés bróm-ciánnal, amely specifikusan hasítja a proteint metionin maradékot, inzulin B láncot elválasztjuk a β-galaktozidáz (metionin inzulint tartalmaz). Ezután a tisztítást végezzük láncok és egyesíti őket, miáltal kettős szálú natív inzulin. Kimutatták, hogy ez nem tartalmaz E. coli fehérjék, endotoxinok és pirogének, a fizikai tulajdonságok nem különböztethető meg a inzulin emberi hasnyálmirigy és tesztvizsgálati rendszert mutat teljes biológiai aktivitással.

Ezt követően, egy alternatív módszert teszteltük: szintetizáljuk prekurzor molekula gén proinzulin, amely vezették be E. coli. Tisztítás után, ez proinzulin hasítja tripszinnel és karboxipeptidáz β-fogadott és a natív inzulin.

Humán inzulin, által előállított E. coli, volt az első „genetikailag fehérje”, tesztelték embereken. Azokban a kísérletekben, az egészséges önkénteseknél azt találták, hogy ez biztonságos minden esetben, amikor alkalmazása rövid (nem okoz allergiás vagy más nemkívánt reakciókat), és lényegében ugyanazt a képességet, hogy sertés inzulin csökkenteni a vér glükóz szintjét, ha szubkután adjuk be, és intravénásán. Jelenleg sok humán inzulin cukorbetegek világszerte. Ezt előzte meg a klinikai vizsgálatok, amelyek során tanulmányozták változásokat az anyagcserét és immunológiai hatások. Ma ez a szokásos kezelési módszer.

2. feladat: végre laboratóriumi munka.

Variant 1 hidrolízis DNP élesztőt és felderítése komponensek hidrolizátum az NPD.

Haladás. A széles levegő kondenzátorcső egy spatulával, hogy helyezze száraz élesztő, és adjunk hozzá 10 ml 10% -os kénsav-oldattal. Helyezzük a csövet forrásban lévő vízfürdőben 1 órán át. Ezután lehűtjük hidrolizátumot és magával vihet, kvalitatív reakciók komponenseinek az NPD.

Biuret reakció a polipeptidek. Ahhoz, hogy 5 hidrolizátumot öntjük cseppenként 10 csepp 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot és 2 csepp 1% -os réz-szulfát oldat. Megfigyelt megjelenését rózsaszín vagy rózsaszín-lila színű.

Silver teszt purin bázisok. Ahhoz, hogy a hidrolizátum csepegtetünk 10 10 csepp ammóniaoldatot, amíg lúgos reakció, majd 20 csepp 2% ammóniás ezüst-nitrát-oldat. Való állás után 3 - 5 perc. képződött világosbarna csapadékot ezüstsók purin bázisok.

Kvalitatív reakció pentóz (Trommer reakció). Ahhoz, hogy 10 a vizsgálati hidrolizátum cseppenkénti ez hozzáadunk 10 csepp 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot és 5 csepp 7% -os réz-szulfát. Óvatosan melegítsük a felső része a csövet forrásban lévő, és 1 percig forraljuk. Ott van a megjelenése egy piros színű.

Molibdén minta foszforsav. Ahhoz, hogy 10 csepp 20 csepp hidrolizátum öntjük molibdén-reagenssel és melegítjük. A folyadékot festett citromsárga színű. A csövet lehűtjük, folyó hideg vízzel. Az a cső alján megjelenik citrom sárga, kristályos csapadék fosfornomolibdenovokislogo ammónium.

2. lehetőség: A tanulmány a dinamika a változás a vércukor koncentrációját intakt állatok (nyúl) 30, 45, 60 perccel a beadás után az isulina hormon.

Az inzulin fejt ki nagy hatással a szénhidrát-anyagcsere, és azért hívják hipoglikémiás tényező. A fő cél a sejtek inzulin izom-, máj- és zsírszövetekben. Az inzulin receptorok felületén lokalizálva a célsejtek és a hormon fejti ki hatását, nem hatol be a sejtbe. A természet az inzulin hatását a szénhidrát-anyagcserére változatos. Ez növeli a permeabilitás a sejtmembránok a glükóz, aminosavak és más vegyületek. Az inzulin megnövelte az aktivitását hexokináz, glikogén, amely ugyanabban az időben, a gátló hatást az enzimek a glükoneogenezis.

A gyakorlati jelentősége. Az inzulin - egy gyógyszer, amely a terápiás célokra, főleg a betegség diabétesz. Beadni, hogy csak azért, mert parenterális miatt fehérje természetét inaktiválódik a gasztrointesztinális traktusban a proteolitikus enzimek. Egy egészséges személy után 20-30 perccel a beadás után az inzulin a vércukorszint 50% -ra csökkent a kiindulási, és 40 perc elteltével, és emelkedni kezd, hogy 90-120 percig eléri norma, vagy akár kissé meghaladja azt.

Nyúl fülkagyló, hogy 0,1 ml-t a vérben, hogy meghatározza a vércukorszint injekció előtt inzulint.

Kezdeti inzulin készítményt tartalmazó 40 U / ml, 50-szeresére hígítottuk (0,2 ml inzulin 9.8 sóoldatban), és adja meg a nyúl szubkután, az oldalsó felületét 0,5 ml így kapott hígítási inzulin, amely 2 egység inzulin.

Az elegyet 30, 45, 60 perccel a beadás után az inzulin nyúl füli véna venni minden egyes alkalommal 0,1 ml vért, hogy meghatározzuk a vércukorszintet orto-toluidin módszerrel. Glükóz hevítve otolidin ecetsavas oldatban adott zöld színű, amelynek intenzitása arányos a glükóz-koncentráció:

D-glükóz + o-toluidint  zöld kondenzációs termék.

Vizsgálati minta. Öntjük centrifugacsőbe 0,9 ml 3% -os triklór-ecetsav-oldatot, és azt 0,1 ml vér. Centrifugában 10 percig 3000 fordulat / perc sebességgel. A felülúszót (centrifugált) öntjük egy tiszta csőbe. Ezután, 0,5 ml A centrifugált bejuttatjuk egy kémcsőbe, adjunk hozzá 2 ml orto-toluidin reagenssel lezárva üvegdugóval, és belehelyeztük egy forrásban levő vízfürdőben 8 percig, zöld színű lesz. Lehűtjük hideg víz alá. Kolorimetriruyut on photoelectrocolorimeter (narancs vagy vörös szűrőn) 5 mm-es küvettában vízzel szemben.

Egy standard minta. Egy standard mintát készítünk, mint egy próba, de bevezetni 0,1 ml standard oldat glükóz (5,6 mmol / l) a vér helyett, keverjük, kimért 0,5 ml ilyen oldatot egy új csőbe, adjunk hozzá 2 ml orto-toluidin reagenssel, forralt vízben fürdő, lehűtjük, majd kolorimetriruyut.

ahol cSt - a glükóz koncentrációja mmol / l standard oldat 5,6 mmol / l;

Április - Extinction vizsgálati minta;

Gasztronómia - Extinction standard oldatot.

2. Biotechnology 8 térfogatrész / szerk. Egorov NS Samuil VD - M. Vyssh.shk. - 1988.

Biotechnológia: megkapjuk a gyógyszerek és fejlődési kilátásai / AI Tentsova, LM Bragintseva, TK Ustynyuk // Gyógyszertár: tudományos folyóiratban. - M. Medicine. - 1988.

4. biotechnológia: Principles and Applications / szerk. Higgins I. Jones J. D. legjobb -. Mir. - 1988.

7. Anyag előadása biotechnológia.

10. Sasson A. biotechnológia: teljesítmények és remény / Trans. az angol. Mehedova SL Mirkin, SM - Mir. - 1987.

11. Mezőgazdasági Biotechnológiai: A tankönyv / szerk .. VS Shevelukha. - M. Executive. wk. - 1988. - 416 p.

Biotechnológiai rekombináns inzulin.

Létrehozása rekombináns fehérjék „második generációs” például inzulin.

Biotechnológiai interferon termelését.

Problémák a szabványosítás interferon készítmények.

Jellemzői mikrobiológiai előállításához interleukin.

A kilátások a biotechnológiai termelési interleukinek géntechnológiai módszerekkel.

Mikrobiológiai szintézisét az emberi növekedési hormon.

Problémák tervezése emberi növekedési hormonok termelésére géntechnológiai.

9. Az ipari biotechnológiai termelését peptid növekedési faktorok